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一种用于浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法.pdf

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一种 用于 浮游植物 原生动物 定量 样品 鉴定 方法
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摘要
申请专利号:

CN201610947661.4

申请日:

2016.10.24

公开号:

CN106483005A

公开日:

2017.03.08

当前法律状态:

实审

?#34892;?#24615;:

审中

法?#19978;?#24773;: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 1/36申请日:20161024|||公开
IPC分类号: G01N1/36 主分类号: G01N1/36
申请人: 中国水产科学研究院长江水产研究所
发明人: 李学梅; 朱永久; 杨德国; 许德高; 张?#20063;?
地址: 430223 湖北省武汉市东湖新技术开发区武大园一路8号
优?#28909;ǎ?/td>
专利代理机构: 武汉宇晨专利事务所 42001 代理人: 王敏锋
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法律状态
申请(专利)号:

CN201610947661.4

授权公告号:

|||

法律状态公告日:

2017.04.05|||2017.03.08

法律状态类型:

实质审查的生效|||公开

摘要

本发明公开了一种浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法,步骤是:A、取纸张,浸染甘油,放置于载玻片上,重复2-3次,甘油均匀的布满盖玻片,纸片用之前残留的甘油浸染;B、将水体中浓缩后定量的浮游植物、原生动物样品稀释,取稀释液于0.1ml的计数框内,晃动载玻片,让样品平铺于计数框内;C、取盖玻片沿45度方向对样品进行盖片,逐渐排出计数框内的空气;D、用第一步已经浸染好甘油的纸片沿着盖玻片的四周进行密封;E、在室温条件下,对样品计数完成后,计数框内样品未见有气泡出现,该封片提高封片效果。法操作简单,成本低廉,可重复利用,不会污染显微镜的物镜,同时封片的效果显著,提高了工作效?#21097;?#25552;高了样品计数的精确?#21462;?/p>

权利要求书

1.一种浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法,其步骤是:
A、取A4纸张,用剪刀将其裁剪为长26mm宽2mm的纸条,浸染甘油,放置于载玻片上,重复
2-3次,甘油均匀的布满盖玻片,纸片用之前残留的甘油浸染,浸染时间为3-4min;
B、将水体中浓缩后定量的浮游植物、原生动物样品?#29992;?#33740;双蒸水稀释10-100倍,取
0.1ml稀释液于0.1ml的计数框内,晃动载玻片,让样品平铺于计数框内,所述的稀释液的浓
缩溶液?#29992;?#33740;双蒸水?#26723;?#27987;度后得到的溶液;
C、取盖玻片沿45度方向对样品进行盖片,逐渐排出计数框内的空气;
D、用第一步已经浸染好甘油0.5-1.0ml的纸片沿着盖玻片的四周进行密封;
E、在室温条件下,对样品计数完成后,计数框内样品未见有气泡出现,已密封。

说明书

一种用于浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法

技术领域

本发明属于水体生态研究领域,更具体涉及一种用于浮游植物、原生动物定量样
品鉴定的封片方法,适用于水库、湖泊、河流、池塘等水体中浮游植物、原生动物定量样品的
鉴定时的前处理,可节约重复制片的时间,提高技术的准确性。

背景技术

浮游植物是在水体中营浮游生活的光合自养生物,是水体的生产者。它们的个体
寿命通常很短,从几个小时到?#29976;?#22825;,在一个生长期内可以繁殖很多代。由于个体较小,浮
游植物对环境变化的响应十分迅速,是水体富营养化监测的重要指标之一。原生动物作为
水体的初级消费者,是一类形态各异,?#26893;技?#24191;的单细胞生物,它们在水生生物物质循环和
能量流动中扮演了极为重要的角色,具有承上启下的功能。因此,浮游植物和原生动物?#36824;?br />泛地应用于水域环境监测及水体富营养化评价中,许多种类也被认为是水体污染的?#29976;?#29983;
物而得到广泛利用。通过浮游植物、原生动物的定量分析来?#28010;?#20854;水体中的生物量是常用
的监测手段。

在对浮游植物和原生动物进行定量分析时,由于水体中它们的生物量较大,鉴定
通常需要较长时间。在计数过程中多数工作者会对样品进行稀释,然而样品必须在?#34892;?#26102;
间内完成计数,否则就会因水分蒸发使计数框内出现气泡造成计量误差,影响计数的准确
性。基于这样一种情况,对盖玻片采取封片措施,延缓样品出现气泡的时间是急需解决的问
题,尤其是针对于初学者。

发明内容

为了解决上述现有技术存在的问题,本发明的目的是在于提供了一种用于浮游植
物、原生动物定量样品鉴定的封片方法,该封片方法操作简单,甘油消耗量少,成本低廉,可
重复利用,不会污染显微镜的物镜,同时封片的效果显著,在一定程度提高了工作效?#21097;?#25552;
高样品计数的精确?#21462;?br />

为了实现上述的目的,本发明采用以下技术方案:

一种浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法,其步骤是:

1、取80g的A4纸张,该纸张具有硬度大、薄、易于吸收甘油的特点。用剪刀将其裁剪
为长26mm宽2mm的纸条,浸染甘油(化学名称:丙三醇,武汉力博瑞生物科技有限公司购买),
放置于载玻片上,重复2-3次,这样在重力的作用下,甘油会逐渐均匀的布满盖玻片,以后
的纸片均可以用之前残留的甘油浸染。浸染时间不宜过长(一般为3-4min),这样能延长纸
片的使用寿命;浸染的量不宜过多(一般是1-3ml),否则会污染盖玻片,影响显微镜下的观
察效果。

2、将水体中(湖泊、池塘等)浓缩(浓缩方法:样品静置24-48h后用浓缩装置将上清
液抽去)后定量的浮游植物、原生动物样品?#29992;?#33740;双蒸水稀释10-100倍,取0.1ml稀释液于
0.1ml的计数框内(ZH7116型浮游生物计数框),轻轻晃动载玻片,让样品平铺于计数框内。
所述的稀释液顾名?#23478;?#23601;是申请人检测的浓缩溶液?#29992;?#33740;双蒸水?#26723;?#27987;度后得到的溶液。
注意:是混合物,在日常的实际实验操作中,若浓缩样品浓度不高(计数框内每个方格内出
?#26893;?#21516;的浮游植物个数为2-3个)则不需要稀释,若浓度太高(超过上述数量),则需要因此
采用?#29992;?#33740;的双蒸水稀释的方式来得到浓度较低的稀释液,从而更好的实验。综上所述:凡
是通过增加溶剂来?#26723;?#27987;度的方法所得到的溶液都是稀释液。

3、取盖玻片沿45度方向对样品进行盖片(图3),该方法会逐渐排出计数框内的空
气,起到最佳的封片效果。

4、用第一步已经浸染好少量甘油(0.5-1.0ml)的纸片沿着盖玻片的四周进行密
封。其中密封的性状如图1所示,用镊子调整纸片的位置做到完美对接,以保证最佳的密封
效果。

5、在室温(20-25℃,以下相同)条件下,对样品计数完成后(3-5h),计数框内样
品仍未见有气泡出现,已密封。表明该封片方法?#19978;?#33879;提高封片效果,避免重复制片,提高
了工作效?#30465;?br />

本发明与现有技术相比,具有以下优点和效果:

1)该方法的操作性简单,所需材料简单(A4纸张、甘油),且能够重复利用,成本低
廉。

2)该方法用浸入甘油的纸张来封片,避免了甘油的浪费和对物镜的污染,延长了
显微镜的使用寿命。

3)该方法封片效果明显,避免样品中水分的蒸发,节约重复制片的时间,提高了工
作效?#21097;?#20063;提高了计数的准确性。

为了验证此种方法的效果,申请人将不封片的样本和按照此种方法封片的样本进
行了比较,比较计数框里出现气泡的时间。实验是在一间密封效果较好的实验室内进行,用
空调控制温度,首先设定温度,待温度稳定后进行实验。实验结果如下:


实验结果显示,在空调能够设置的温度?#27573;?#20869;,此种封片方法比普通方法的时间
延长5小?#24065;?#19978;,极显著的提高了封片效果。

附图说明

图1为一种浮游植物、原生动物定量鉴定封片装置示意图。

图2为一种封片用的纸片示意图。

将纸片放在甘油里进行浸染,然后再放在载玻片上。

图3为一种0.1ml计数框进行封片的演示图。

其中:1-浮游生物计数框、2-盖玻片、3-纸条、4-载玻片。

具体实施方式

实施例1:

下面结合附图对本发明进行具体说明。

本发明提供了用于浮游植物、原生动物定量样品鉴定的一种新型封片方法,其完
整结构如图1所示,图中0.1ml ZH7116型浮游生物计数框1,盖玻片2,长26mm宽2mm的纸条3,
载玻片4。纸条的长宽是根据计数框的大小而定,这样才能和盖玻片2相吻合,起到最佳的密
封效果。

一种浮游植物、原生动物定量样品鉴定的封片方法,其步骤是:

1、用剪刀将80g的A4纸张裁剪为长26mm宽2mm的纸条,浸染甘油(1.5ml),放置于载
玻片4上,重复3次,这样在重力的作用下,甘油会逐渐均匀的布满盖玻片2,以后的纸条3均
可以用之前残留的甘油浸染。浸染的甘油量不宜过多,过多会污染盖玻片4,影响显微镜下
观察效果。浸染时间为3min,不宜过长,避免损耗纸条3的使用寿命;

2、将黄颡鱼主养池塘中浓缩的浮游植物(以绿藻门、硅藻门和裸藻门为主)、原生
动物(以纤毛虫为主)浓缩定量样品用灭菌的双蒸水稀释20倍,取0.1ml 稀释液于0.1ml的
计数框内,轻轻晃动载玻片4,让样品平铺于浮游生物计数框1内。

3、取盖玻片2沿45度方向对样品进行盖片(图3),该方法会逐渐排出浮游生物计数
框1内的空气,起到最佳的封片效果。

4、用第一步已经准备好的浸染少量甘油的纸条3沿着盖玻片2的四周进行密封。其
中密封的性状如图1所示,用镊子调整纸片的位置做到完美对接,以保证最佳的密封效果。

5、在室温条件下(23℃),对样品计数完成后(4h),计数框内样品仍未见有气泡出
现,已密封,表明该封片方法?#19978;?#33879;提高封片效果,避免重复制片,提高了工作效?#30465;?br />

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