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一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法.pdf

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一种 模拟 动物 环境 内植酸酶解磷 含量 测定 方法
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摘要
申请专利号:

CN201611077973.0

申请日:

2016.11.30

公开号:

CN106706520A

公开日:

2017.05.24

当前法律状态:

实审

有效性:

审中

法?#19978;?#24773;: 实质审查的生效IPC(主分类):G01N 21/25申请日:20161130|||公开
IPC分类号: G01N21/25 主分类号: G01N21/25
申请人: 沈阳波音饲料有限公司
发明人: 刘娇; 王昕陟; 李东全; 杨光; 郭伟; 王密; 李忠秋; 孙丹彤
地址: 110000 辽宁省沈阳市于洪区于洪乡前民村
优先权:
专利代理机构: 沈阳易通专利事务所 21116 代理人: 于丽丽
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法律状态
申请(专利)号:

CN201611077973.0

授权公告号:

|||

法律状态公告日:

2017.06.16|||2017.05.24

法律状态类型:

实质审查的生效|||公开

摘要

本发明适用于饲料原料及加工工艺技术领域,提供了一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,以解决在畜禽生产中无法客观评定植酸酶使用效果的问题;该测定方法首先将底物各原料混合后粉碎,添加待测植酸酶与所述底物混合,同时作空白对照,分别加入到胃蛋白酶盐酸溶液中,水浴冷却后测定溶液pH,准确移取上清液至离心管中,并准确量取剩余上清液,将离心管中的上清液离心得上清液A,再准确移取1mL上清液A,加入钒钼酸胺显色剂,用分光光度计比色测定,最后从磷标准曲线中查得磷的浓度,计算添加待测植酸酶底物多释放的水溶性磷含量。本发明通过底物多释放水溶性磷的多寡来判定植酸酶的作用大小,选择质佳的植酸酶,有效减少外源磷的使用量。

权利要求书

1.一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,包括以下步骤:首先将底物各原
料混合后粉碎,所述底物由以下原料按照质量百分比组成:玉米60%、豆粕20%、棉粕10%
及DDGS 10%,添加待测植酸酶与所述底物混合,同时作空白对照,分别加入到胃蛋白酶盐
酸溶液中,40℃恒温水浴,冷却至室温后再测定溶液pH,准确移取12mL上清液至离心管中,
并准确量取剩余上清液,将离心管中的上清液离?#27169;?#24471;上清液A,再准确移取离心管中上清
液A 1mL,加入钒钼酸胺显色剂,再加蒸馏水定容,摇匀静置,用分光光度计比色测定,最后
从磷标准曲线中查得待测植酸酶磷浓度和空白对照中磷浓度,计算在模拟胃环境中添加植
酸酶饲料底物多释放的水溶性磷含量。
2.如权利要求1所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其具体实现
步骤如下:
(1)首先制备底物:所述底物由如下原料按照质量百分比组成:玉米60%、豆粕20%、棉
粕10%及DDGS 10%;按照上述配比称取各原料混合后粉碎,并过40?#21487;福?br />
(2)分别称取3~7g所述步骤(1)制备的底物各置于250mL碘量瓶中,按1000FYT/kg的酶
活添加量添加0.1~1mg的待测植酸酶加入到其中一个碘量瓶中为处理组,同时平行做空白
对照,即底物中不添加待测植酸酶;
(3)然后将100mL胃蛋白酶盐酸溶液缓慢加入至碘量瓶中制?#19978;?#21270;液,缓慢搅拌后测定
消化液的pH,当pH大于3.5,用pH 2.0的盐酸溶液将消化液调整至3.0~3.5之间,严密封口,
所述盐酸溶液为取质量分数为36%的浓盐酸0.83mL,定容至1000mL;
(4)40℃恒温水浴摇床2h,冷却至室温后再测定溶液pH,pH应保持在4.0~4.5之间;
(5)准确移取12mL碘量瓶中的上清液至离心管中,同时,准确量取碘量瓶中剩余上清液
的体积,将上清液4000rpm离心10min,得上清液A;
(6)准确移取离心管中1mL上清液A至50mL比色管中,加入10mL钒钼酸胺显色剂,加蒸馏
水定容至50mL,摇匀静置10min;
(7)用分光光度计400nm比色测定,从磷标准曲线中查得磷的浓度,即待测植酸酶磷浓
度C1和空白对照磷浓度C2,;
(8)磷标准曲线的绘制:准确移取磷标准溶液0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL
分别置于50mL容量瓶中,分别加入钒钼酸铵显色剂10mL,用水稀释?#37327;?#24230;,摇匀,静置
10min,在400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光度,以磷含量为横坐标,吸光度为纵坐
标,绘制磷标准曲线;
(9)计算在模拟胃环境中添加植酸酶饲料底物多释放的水溶性磷含量p,公式为:
<mrow> <mi>P</mi> <mo>=</mo> <mfrac> <mrow> <mi>C</mi> <mn>1</mn> <mo>&times;</mo> <mrow> <mo>(</mo> <mi>V</mi> <mn>1</mn> <mo>+</mo> <mn>12</mn> <mo>)</mo> </mrow> </mrow> <mi>m</mi> </mfrac> <mo>-</mo> <mfrac> <mrow> <mi>C</mi> <mn>2</mn> <mo>&times;</mo> <mrow> <mo>(</mo> <mi>V</mi> <mn>2</mn> <mo>+</mo> <mn>12</mn> <mo>)</mo> </mrow> </mrow> <mi>m</mi> </mfrac> </mrow>
其中,C1:待测植酸酶磷浓度(μg/mL);C2:空白对照磷浓度(μg/mL);v1:添加待测植酸
酶碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);V2:空白对照碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);m:底物
样?#20998;?#37327;(g)。
3.如权利要求1或2所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其特征在
于,所述的待测植酸酶为非?#36879;?#28201;型,固态颗粒状,酶活为5000~50000FYT/g。
4.如权利要求1或2所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其特征在
于,所述胃蛋白酶盐酸溶液是将胃蛋白酶与盐酸溶液混合,混合后pH为2.0,胃蛋白酶的质
量百分比浓度为0.2%,所述盐酸溶液为取质量分数为36%的浓盐酸0.83mL,定容至
1000mL,pH为2.0。
5.如权利要求1或2所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其特征在
于,所述钒钼酸胺显色剂的配制具体步骤为:称取偏钒酸铵1.25g,加水200mL,加热溶解不
能沸腾,冷却后加质量分数为65%的浓硝酸250mL溶解制成溶液A;另外称取钼酸铵25g,加
水400mL加热溶解,冷却,制成溶液B,将溶液A和溶液B混合,定容至1000mL。
6.如权利要求2所述的一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其特征在于,
所述磷标准溶液的配制具体步骤为:取105℃烘至恒重的磷酸二氢钾0.2195g溶于蒸馏水
中,加质量分数为65%的浓硝酸3mL,定容至1000mL。

说明书

一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法

技术领域

本发明涉及饲料原料及加工工艺技术领域,尤其涉及一种模拟动物胃环境内植酸
酶解磷含量测定方法。

背景技术

磷是畜禽日粮中仅次于能量、蛋白质及钙的重要营养物?#21097;?#26159;动物体生长发育所
必需的常量矿物?#35797;?#32032;,参与体内许多生理功能和生物化学?#20174;Α?#24120;用植物性饲料中60%-
70%的磷是以植酸或者植酸盐的有机磷?#38382;?#23384;在,反刍动物瘤胃微生物可以产生大量的植
酸酶,可以很好地利用植酸磷,而单胃动物对植酸磷的利用效率很低,食入的磷有75%都随
粪便排出,需要通过在饲料中添加磷酸氢钙等无机磷的?#38382;?#36827;行补充,不仅增加成本,还会
造成环境污染。

植酸酶在动物胃中可以将植酸磷释放,提高植物性饲料中磷的利用效?#21097;?#20943;少外
源磷的使用量,节省成本,并减少环境污染。另外,植酸往往还会和其他养分(如锌、铁等)以
络合物的?#38382;?#23384;在,不易解离,使用植酸酶可以提高此部分养分的使用效?#30465;?#29616;在,随着饲
料工业的快速发展,饲料用植酸酶制剂的应用也越来越广泛,不同公司采用不同的生产菌
种、基因来源生产植酸酶,其使用方式及活性评定方法各有差异,因此在畜禽生产中无法客
观的评定植酸酶的使用效果。植酸酶是一种蛋白?#21097;?#36827;入动物胃中会被胃蛋白酶降解,饲料
中植酸酶在胃中的有效利用率及有效解磷含量是个未知数,目前还没有人测定过。因此,通
过体外模拟胃环境来测定植酸酶的有效解磷含量,对于快速评定植酸酶质量,选择质佳的
植酸酶是极为重要的。

植物性饲料中的磷通常是以植酸磷?#38382;?#23384;在,植酸磷很难被单胃动物利用,因此,
植物性饲料中总磷的消化利用率很低,需要外源补充磷。植酸酶在动物胃中可以将植酸磷
释放,提高植物性饲料中磷的利用效?#21097;?#20943;少外源磷的使用量,节省成本,并减少环境污染。

植酸往往还会和其他养分(如锌、铁等)以络合物的?#38382;?#23384;在,不易解离,使用植酸
酶可以提高此部分养分的使用效?#30465;?#20877;者,有证据表明,NSP酶等外源酶作用的发挥效果有
赖于植酸酶的支持;在没有使用植酸酶的情况下,NSP酶作用效果不?#36873;?#25925;而,选择质佳的植
酸酶对于提高饲粮质量是极为重要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,通过底
物多释放水溶性磷的多寡来判定植酸酶的作用大小,进而选择质佳的植酸酶,有效减少外
源磷的使用量。

为实现本发明的上述目?#27169;?#26412;发明采用如下技术方案:

一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,包括以下步骤:首先将底物各
原料混合后粉碎,所述底物是由以下原料按照质量百分比组成:玉米60%、豆粕20%、棉粕
10%及DDGS 10%,添加待测植酸酶与所述底物混合,同时作空白对照,分别加入到胃蛋白
酶盐酸溶液中,40℃恒温水浴,冷却至室温后再测定溶液pH,准确移取12mL上清液至离心管
中,并准确量取剩余上清液,将离心管中的上清液离?#27169;?#24471;上清液A,再准确移取离心管中上
清液A 1mL,加入钒钼酸胺显色剂,再加蒸馏水定容,摇匀静置,用分光光度计比色测定,最
后从磷标准曲线中查得磷的浓度,计算在模拟胃环境中添加植酸酶饲料底物多释放的水溶
性磷含量。

一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其具体实?#26893;?#39588;如下:

(1)首先制备底物:所述底物由如下原料按照质量百分比组成:玉米60%、豆粕
20%、棉粕10%及DDGS 10%;按照上述配比称取各原料混合后粉碎,并过40?#21487;福?br />

(2)分别称取3~7g所述步骤(1)制备的底物,各置于250mL碘量瓶中,按1000FYT/
kg的酶活添加量添加0.1~1mg的待测植酸酶加入到其中一个碘量瓶中,同时平行做空白对
照(底物中不加入待测植酸酶);

(3)然后将100mL胃蛋白酶盐酸溶液缓慢加入至碘量瓶中制?#19978;?#21270;液,缓慢搅拌后
测定消化液的pH,当pH大于3.5,用pH 2.0的盐酸溶液将消化液调整至3.0~3.5之间,严密
封口,所述盐酸溶液为取质量分数为36%的浓盐酸0.83mL,定容至1000mL;

(4)40℃恒温水浴摇床2h,冷却至室温后再测定溶液pH,pH应保持在4.0~4.5之
间;

(5)准确移取12mL碘量瓶中的上清液至离心管中,同时,准确量取碘量瓶中剩余上
清液的体积,将上清液4000rpm离心10min,得上清液A;

(6)准确移取离心管中1mL上清液A至50mL比色管中,加入10mL钒钼酸胺显色剂,加
蒸馏水定容至50mL,摇匀静置10min;

(7)用分光光度计400nm比色测定,从磷标准曲线中查得磷的浓度(待测植酸酶磷
浓度C1和空白对照磷浓度C2);

(8)磷标准曲线的绘制:准确移取磷标准溶液0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、
10.0mL分别置于50mL容量瓶中,分别加入钒钼酸铵显色剂10mL,用水稀释?#37327;?#24230;,摇匀,静
置10min,在400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光度,以磷含量为横坐标,吸光度为纵
坐标,绘制磷标准曲线;

(9)计算在模拟胃环境中添加植酸酶饲料底物多释放的水溶性磷含量p,公式为:


其中,C1:待测植酸酶磷浓度(μg/mL);C2:空白对照磷浓度(μg/mL);v1:添加待测
植酸酶碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);V2:空白对照碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);m:
底物样?#20998;?#37327;(g)。

进一步地,所述步骤的植酸酶为非?#36879;?#28201;型,固态颗粒状,酶活为5000~
50000FYT/g。

进一步地,所述胃蛋白酶盐酸溶液:将胃蛋白酶与盐酸溶液混合,混合后pH为2.0,
胃蛋白酶的质量百分比浓度为0.2%,所述盐酸溶液为取质量分数为36%的浓盐酸0.83mL,
定容至1000mL,pH为2.0。

进一步地,所述钒钼酸胺显色剂的配制具体步骤为:称取偏钒酸铵1.25g,加水
200mL,加热溶解不能沸腾,冷却后加质量分数为65%的浓硝酸250mL溶解制成溶液A;另外
称取钼酸铵25g,加水400mL加热溶解,冷却,制成溶液B,将溶液A和溶液B混合,定容至
1000mL。

进一步地,所述磷标准溶液的配制具体步骤为:取105℃烘至恒重的磷酸二氢钾
0.2195g溶于蒸馏水中,加质量分数为65%的浓硝酸3mL,定容至1000mL。

进一步地,与现有技术相比,本发明的有益效果是:

本发明提供的模拟胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,在模拟胃环境条件下测定
底物释放水溶性磷含量,通过底物释放水溶性磷的多寡来判定植酸酶的作用大小,选择质
佳的植酸酶,提高植物性饲料中磷的利用效?#21097;?#20943;少外源磷的使用量,节省成本,并减少环
境污染。

植酸磷是一个含六个磷酸基团的环状化合物,在大多数油籽和豆科植物中占干物
质的1%-5%。通常将植酸磷列入抗营养因子,因为它不仅与植物中40%-70%的磷结合,而
且植酸磷还与其它二价和三价金属元素如钙、镁、锌和铁等金属离?#22495;?#21512;形成极难溶解的
化合物,动物很?#30416;?#25910;。反刍动物瘤胃微生物产生大量的植酸酶,可以很好地利用植酸磷,
而单胃动物对植酸磷的利用效率很低,食入的磷有75%都随粪便排出,需要通过在饲料中
添加磷酸氢钙等无机磷的?#38382;?#36827;行补充。

植酸酶是一类特殊的磷酸单酯酶,对植酸磷的降解率有一个很宽的pH范围,有研
究表明,植酸酶在酸性条件下活性较强,主要在胃中发挥作用。植酸酶在胃中可有效分解存
在于饲料中的植酸,将植酸和植酸盐中的磷酸基团逐一水解,最终释放出肌醇和无机磷,提
高植酸磷的利用?#21097;?#21516;时由于解除了植酸的抗营养作用,可以提高单胃动物对淀粉、脂肪和
蛋白?#23454;?#33829;养物质的利用率,并且释放被植酸鳌合的各种矿物元素,促进了动物矿质营养
的平衡,改善动物的组织结构,促进动物生长。

植酸酶是一种蛋白?#21097;?#36827;入胃中会被胃蛋白酶降解,无法准确估测植酸酶的有效
利用?#21097;?#22240;此通过模拟胃环境,在体外条件下测定底物释放水溶性磷含量,通过底物释放水
溶性磷的多寡来判定植酸酶的有效利用?#21097;?#23545;于选择质佳的植酸酶具有重要的意义。

附图说明

图1是本发明的磷标准曲线图。

具体实施方式

下面结合具体附图及实施例进一步详细说明本发明。

本发明实施例中的试验试?#27169;?br />

1、试验材料:植酸酶,非?#36879;?#28201;型,固态颗粒状,酶活为5000~50000FYT/g。

2、试验试剂和药品。

(1)胃蛋白酶盐酸溶液:将胃蛋白酶与盐酸溶液混合,混合后pH为2.0,胃蛋白酶的
质量百分比浓度为0.2%。配制时需小心缓慢搅拌,防止胃蛋白酶失活。

(2)钒钼酸胺显色剂:称取偏钒酸铵1.25g,加水200mL,加热溶解(不能沸腾),冷却
后加质量分数为65%的浓硝酸250mL溶解制成溶液A;称取钼酸铵25g,加水400mL加热溶解,
冷却后制成溶液B,将溶液A与溶液B混合,定容至1000mL。

(3)磷标准溶液:将105℃烘至恒重的磷酸二氢钾0.2195g溶于蒸馏水中,加质量分
数为65%的浓硝酸3mL,定容至1000mL。

(4)盐酸溶液:0.83mL的浓盐酸(质量分数为36%),定容至1000mL,pH为2.0。

(5)底物:由如下原料按照质量百分比组成:玉米60%、豆粕20%、棉粕10%及DDGS
10%。

3、仪器:恒温水浴摇床(SHZ-A,上海浦东物理光学仪器厂),低速离心机(LD5-2B,
雷勃尔),可见分光光度计(721,上海菁华科技仪器有限公司)。

实施例1

一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其具体实?#26893;?#39588;如下:

(1)按照底物上述配比称取底物各组分,将底物原料分别粉碎混合后全?#23458;?#36807;40
?#21487;福?#20998;别称取5g(准?#20998;?.0001g)(m),各置入250mL碘量瓶中;

(2)按1000FYT/kg的酶活添加量,取5000FYT/g的1mg(精准至0.1mg)某厂家待测植
酸酶加入到其中一个碘量瓶中,同时平行做空白对照(底物中不添加待测植酸酶);

(3)向碘量瓶中缓慢加入胃蛋白酶盐酸溶液100mL制?#19978;?#21270;液,缓慢搅拌后测定消
化液的pH,若发现pH大于3.5,应用pH 2.0的盐酸溶液将消化液调整至3.0~3.5之间,严密
封口;

(4)将严密封口的碘量瓶放入提前预热的恒温水浴摇床,40℃水浴2h;

(5)水浴结束后将碘量瓶冷却至室温,测定溶液pH;一般情况下,pH在4.0~4.5之
间。若超过此范围,则此次测定失败,需重新测定;

(6)准确移取碘量瓶中的上清液12mL,转移至15mL的离心管中。同时,准确量取碘
量瓶中剩余上清液的体积;

(7)将离心管置于离心机中,平衡后4000rpm离心10min,得上清液A;

(8)准确移取1mL离心管中的上清液A至50mL比色管中,加入10mL钒钼酸胺显色剂,
加蒸馏水定容至50mL,摇匀静置10min;

(9)用分光光度计400nm比色测定,从磷标准曲线中查得磷的浓度(C1和C2);

(10)磷标准曲线的绘制:准确移取磷标准溶液0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、
10.0mL分别置于6个50mL容量瓶中,分别加入钒钼酸铵显色剂10mL,用水稀释?#37327;?#24230;,摇匀,
静置10min,在400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光?#21462;?#20197;磷含量为横坐标,吸光度为
纵坐标,绘制磷标准曲线,如图1所示;

(11)结果计算

在模拟胃环境中添加植酸酶饲料底物多释放的水溶性磷含量(P),公式为:


其中,C1:待测植酸酶磷浓度(μg/mL);C2:空白对照磷浓度(μg/mL);v1:添加待测
植酸酶碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);V2:空白对照碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);m:
底物样?#20998;?#37327;(g);

(12)试验结果

试验结果如表1所示,表明待测植酸酶能明显提高水溶性磷的释放量。

表1植酸酶解磷含量测定结果



实施例2

一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其具体实?#26893;?#39588;如下:

(1)按照底物上述配比称取底物各组分,将底物原料分别粉碎混合后全?#23458;?#36807;40
?#21487;福?#20998;别称取3g(准?#20998;?.0001g)(m),各置入250mL碘量瓶中;

(2)按1000FYT/kg的酶活添加量,取10000FYT/g的0.3mg(精准至0.1mg)某厂家待
测植酸酶加入到其中一个碘量瓶中,同时平行做空白对照(底物中不加入待测植酸酶);

(3)向碘量瓶中缓慢加入胃蛋白酶盐酸溶液100mL,缓慢搅拌后测定消化液的pH,
若发现pH大于3.5,应用pH 2.0的盐酸溶液将消化液调整至3.0~3.5之间,严密封口;

(4)将严密封口的碘量瓶放入提前预热的恒温水浴摇床,40℃水浴2h;

(5)水浴结束后将碘量瓶冷却至室温,测定溶液pH;一般情况下,pH在4.0~4.5之
间;若超过此范围,则此次测定失败,需重新测定;

(6)准确移取碘量瓶中的上清液12mL,转移至15mL的离心管中。同时,准确量取碘
量瓶中剩余上清液的体积;

(7)将离心管置于离心机中,平衡后4000rpm离心10min,得上清液A;

(8)准确移取1mL离心管中的上清液A至50mL比色管中,加入10mL钒钼酸胺显色剂,
加蒸馏水定容至50mL,摇匀静置10min;

(9)用分光光度计400nm比色测定,从磷标准曲线中查得磷的浓度(C1和C2)。

(10)磷标准曲线的绘制:准确移取磷标准溶液0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、
10.0mL分别置于6个50mL容量瓶中,分别加入钒钼酸铵显色剂10mL,用水稀释?#37327;?#24230;,摇匀,
静置10min,在400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光?#21462;?#20197;磷含量为横坐标,吸光度为
纵坐标,绘制磷标准曲线,如图1所示;

(11)结果计算

在模拟胃环境中添加植酸酶底物多释放的水溶性磷含量(P),公式为:


其中,C1:待测植酸酶磷浓度(μg/mL);C2:空白对照磷浓度(μg/mL);v1:待测植酸
酶碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);V2:空白对照碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);m:底物
样?#20998;?#37327;(g);

(12)试验结果

试验结果如表2所示,表明待测植酸酶能明显提高水溶性磷的释放量。

表2植酸酶解磷含量测定结果



实施例3

一种模拟动物胃环境内植酸酶解磷含量测定方法,其具体实?#26893;?#39588;如下:

(1)按照底物上述配比称取底物各组分,将底物原料分别粉碎混合后全?#23458;?#36807;40
?#21487;福?#20998;别称取7g(准?#20998;?.0001g)(m),各置入250mL碘量瓶中;

(2)按1000FYT/kg的酶活添加量,取50000FYT/g的0.14mg(精准至0.1mg)待测植酸
酶加入到其中一个碘量瓶中,同时平行做空白对照(底物中不添加待测植酸酶);

(3)向碘量瓶中缓慢加入胃蛋白酶盐酸溶液100mL,缓慢搅拌后测定消化液的pH,
若发现pH大于3.5,应用pH 2.0的盐酸溶液将消化液调整至3.0~3.5之间,严密封口。

(4)将严密封口的碘量瓶放入提前预热的恒温水浴摇床,40℃水浴2h;

(5)水浴结束后将碘量瓶冷却至室温,测定溶液pH;一般情况下,pH在4.0~4.5之
间;若超过此范围,则此次测定失败,需重新测定;

(6)准确移取12mL碘量瓶中的上清液,转移至15mL的离心管中。同时,准确量取碘
量瓶中剩余上清液的体积;

(7)将离心管置于离心机中,平衡后4000rpm离心10min,得上清液A;

(8)准确移取1mL离心管中的上清液A至50mL比色管中,加入10mL钒钼酸胺显色剂,
加蒸馏水定容至50mL,摇匀静置10min;

(9)用分光光度计400nm比色测定,从磷标准曲线中查得磷的浓度(C1和C2);

(10)磷标准曲线的绘制:准确移取磷标准溶液0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、
10.0mL分别置于6个50mL容量瓶中,分别加入钒钼酸铵显色剂10mL,用水稀释?#37327;?#24230;,摇匀,
静置10min,在400nm波长下用分光光度计测各溶液的吸光?#21462;?#20197;磷含量为横坐标,吸光度为
纵坐标,绘制磷标准曲线,如图1所示;

(11)结果计算

在模拟胃环境中添加植酸酶底物多释放的水溶性磷含量(P),公式为:


其中,C1:待测植酸酶磷浓度(μg/mL);C2:空白对照磷浓度(μg/mL);v1:添加待测
植酸酶碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);V2:空白对照碘量瓶中剩余上清液的体积(mL);m:
底物样?#20998;?#37327;(g);

(12)试验结果

试验结果如表3所示,表明待测植酸酶能明显提高水溶性磷的释放量。

表3植酸酶解磷含量测定结果



以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精
神和原则之内所作的任何修改、等同替?#32531;透?#36827;等,均应包含在本发明的保护范围之内。

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