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混合菌群微生物制剂及其在处理污水中的应用.pdf

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混合 微生物 制剂 及其 处理 污水 中的 应用
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摘要
申请专利号:

CN201410181469.X

申请日:

2014.04.30

公开号:

CN103923868A

公开日:

2014.07.16

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法?#19978;?#24773;: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):C12N 1/20申请日:20140430|||公开
IPC分类号: C12N1/20; C02F3/34; C12R1/01(2006.01)N; C12R1/38(2006.01)N 主分类号: C12N1/20
申请人: 山东大学
发明人: 裴海燕; 邵媛媛; 胡文容; 孟盼盼; 李政
地址: 250061 山东省济南市历城区山大南路27号
优?#28909;ǎ?/td>
专利代理机构: 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 代理人: 彭成
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法律状态
申请(专利)号:

CN201410181469.X

授权公告号:

||||||

法律状态公告日:

2016.04.06|||2014.08.13|||2014.07.16

法律状态类型:

授权|||实质审查的生效|||公开

摘要

本发明公开了一种混合菌群微生物制剂,是由类芽孢杆菌、施氏假单胞菌、假产碱假单胞菌和食油假单胞菌组成的菌悬?#28023;?#24635;活菌数为3.8*108CFU/ml以上。所述混合菌群微生物制剂可以用于处理污水,可以加强秋季人工湿地处理受污染河水及城镇生活污水的能力,具体应用时,方法为:将本发明的混合菌群微生物制剂投加到秋季人工湿地系统中,加入量为污水体积的1%;处理时间为7天或7天以上。经检测,采用本发明的混合菌群微生物制剂处理污水7天后,处理后的受污染河水出水COD、总氮、总磷的含量达到《地表水环?#25345;?#37327;标准?#21457;?#31867;水?#26102;?#20934;,处理后的城镇生活污水出水COD、氨氮和总磷的含量指标达到《城镇污水处理厂污染物排放标准》一级B标准。

权利要求书

权利要求书
1.  一种混合菌群微生物制剂,其特征在于:是由类芽孢杆菌、施氏假单胞菌、假产碱假单胞菌和食油假单胞菌组成的菌悬?#28023;?#20854;中,活菌数为3.8×108CFU/ml以上。

2.  根据权利要求1所述的混合菌群微生物制剂,其特征在于:
所述类芽孢杆菌选自保藏编号为CCTCC NO:M2011120的菌种,该菌?#22336;?#31867;命名为:Paenibacillus sp.XP1,保藏日期为2011年4月10日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072;
所述施氏假单胞菌选自保藏编号为CCTCC NO:M2011431的菌种,该菌?#22336;?#31867;命名为Pseudomonas stutzeri XP2,保藏日期为2011年11月27日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072;
所述假产碱假单胞菌选自保藏编号为CCTCC NO:M2012225的菌种,该菌?#22336;?#31867;命名为Pseudomonas pseudoalcaligenes CL-1,保藏日期为2012年6月13日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072;
所述食油假单胞菌选自保藏编号为CCTCC NO:M2012226的菌种,该菌?#22336;?#31867;命名为Pseudomonas oleovorans CL-3,保藏日期为2012年6月13日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072。

3.  权利要求1或2所述的混合菌群微生物制剂的制备方法,其特征在于:将斜面保存的类芽孢杆菌用接?#21482;?#21038;取1环菌苔,接种至200mL反硝化培养液中,30~35℃,180~220r/min,摇床震荡培养24~36h,获得活化的菌株培养?#28023;?#33740;株培养液在5000~8000r/min下离心15~20min,去上清液获得菌体细胞,用无菌水稀释成1.5g湿菌体/L的菌悬?#28023;?#24471;类芽孢杆菌菌悬?#28023;?#21516;样的方法制备得到施氏假单胞菌菌悬液、假产碱假单胞菌菌悬液和食油假单胞菌菌悬?#28023;?#23558;四种菌悬液等体积量混合,混匀,即得混合菌群微生物制剂;
所述反硝化培养液的组成为:每1L反硝化培养液中,含有以下组分:CH3COONa,2g;KH2PO4,0.4g;MgSO4·7H2O,0.6g;CaCl2·2H2O,0.07g;KNO3,1g;Tris缓冲液12mL;微量元素2mL;余量为水;pH值为7.0~7.2。制备时,将各组分混合混匀,调节pH值至7.0~7.2,110℃高压灭菌20min,即得。

4.  权利要求1或2所述的混合菌群微生物制剂在处理污水中的应用。

5.  权利要求1或2所述的混合菌群微生物制剂在加强秋季人工湿地处理受污染河水及城镇生活污水的能力中的应用。

6.  根据权利要求4或5所述的应用,其特征在于:具体应用时,方法为:将混合菌群微生物制剂投加到秋季人工湿地系统中,加入量为污水体积的1%;处理时间为7天或7天以上。

7.  根据权利要求6所述的应用,其特征在于:所述秋季人工湿地的结构为:包括基体,基体高600~650mm,?#26412;?50~500mm;基体内距基体底端50mm处安装有出水管,出水管上设有用于控制的阀门和出水口;基体内安装有水位控制管;基体上方设有进水管,进水管上设有进水口;基体内?#19978;?#21040;上依次设有碎石层、细?#23433;?#21644;土壤层,其中,碎石层由粒径10~20mm的碎石填充而成,厚度为250~300mm;细?#23433;?#30001;粒径1~2mm的细砂填充而成,厚度为50-100mm;土壤层由土壤填充而成,厚度为100-150mm;土壤层上种植有芦苇。

8.  根据权利要求7所述的应用,其特征在于:芦苇苗自三?#36335;?#31181;植入人工湿地系统中,每隔2天用革兰氏营养液进行浇灌,一个月后,开始浇灌水,每2天换水一次;处理污水时,换受处理污水进行浇灌。

说明书

说明书混合菌群微生物制剂及其在处理污水中的应用
技术领域
本发明涉及一种混合菌群微生物制剂,及其在处理污水中的应用,尤其是在加强秋季人工湿地处理受污染河水及城镇生活污水的能力中的应用,属于环保技术领域。
背景技术
人工湿地是一种由人工建造和监督控制的,与沼泽地类似的地面,它利用自然生态系统中的物理、化学和生物的三重协同作用来实现对污水的净化。据国外资料报道,一般人工湿地的工程造价和运行费用仅为传统二级活性污泥法的1/10~1/2,单位污水耗电和污水处理费用明显低于传统污水处理厂。人工湿地系统中,微生物的活动是废水有机物?#21040;?#30340;主要因素,是吸收和?#21040;?#27745;染物的主要生物群体和?#26800;?#32773;。在氮的去除方面起主要作用的是氨化细菌、亚硝化细菌和反硝化细菌。磷的去除主要通过植物和部分微生物的吸收利用以及湿地基质的吸附。
夏季人工湿地中植物生长茂盛,水体中微生物活动旺盛,能够更好的利用污水中的有机物,氮磷元素,对污水具有良好的净化作用。然而秋季时,湿地植物成熟,生长代谢减弱,对氮磷元素的吸收作用减弱。同时随着气温的?#26723;停?#28287;地系统中微生物的代谢作用减弱,因此在秋季通过增加植物根际优势微生物的数量,采用微生物技术强化人工湿地来增强污染治理力度,是提高氮磷去除?#30465;?#33410;省治污成本的最佳途径。直接增加根际微生物的数量已经成为提高湿地处理效果的发展趋?#21860;?
发明内容
针对上述现有技术,鉴于微生物强化人工湿地工艺在污水处理中的广阔的应用前景,本发明提供了一种混合菌群微生物制剂,及其在加强秋季人工湿地处理受污染河水及城镇生活污水的能力中的应用。
本发明是通过以下技术方案实现的:
一种混合菌群微生物制剂,是由类芽孢杆菌、施氏假单胞菌、假产碱假单胞菌和食油假单胞菌组成的菌悬?#28023;?#22235;种菌的总活菌数为3.8×108CFU/ml以上。
进一步地,所述类芽孢杆菌选自保藏编号为CCTCC NO:M2011120的菌种,该菌?#22336;?#31867;命名为:Paenibacillus sp.XP1,保藏日期为2011年4月10日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072。记载在申请人的另一项中国专利中,专利号201110121394.2,公开号102220265A。
进一步地,所述施氏假单胞菌选自保藏编号为CCTCC NO:M2011431的菌种,该菌?#22336;?#31867;命名为Pseudomonas stutzeri XP2,保藏日期为2011年11月27日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072。记载在申请人的另一项中国专利申请中,专利申请号201210201671.5,公开号102899263A。
进一步地,所述假产碱假单胞菌选自保藏编号为CCTCC NO:M2012225的菌种,该菌?#22336;?#31867;命名为Pseudomonas pseudoalcaligenes CL-1,保藏日期为2012年6月13日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072。记载在申请人的另一项中国专利申请中,专利申请号201310032730.5,公开号103114062A。
进一步地,所述食油假单胞菌选自保藏编号为CCTCC NO:M2012226的菌种,该菌?#22336;?#31867;命名为Pseudomonas oleovorans CL-3,保藏日期为2012年6月13日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072。记载在申请人的另一项中国专利中,专利号201210269891.1,公开号102776145A。
所述混合菌群微生物制剂的制备方法,如下:
将斜面保存的类芽孢杆菌用接?#21482;?#21038;取1环菌苔,接种至200mL反硝化培养液中,30~35℃,180~220r/min,摇床震荡培养24~36h,获得活化的菌株培养?#28023;?#33740;株培养液在5000~8000r/min下离心15~20min,去上清液获得菌体细胞,用无菌水稀释成1.5g湿菌体/L的菌悬?#28023;?#24471;类芽孢杆菌菌悬?#28023;?#21516;样的方法(步骤、参数、培养基均相同)制备得到施氏假单胞菌菌悬液、假产碱假单胞菌菌悬液和食油假单胞菌菌悬?#28023;?#23558;四种菌悬液等体积量混合,混匀,即得混合菌群微生物制剂。
所述反硝化培养液的组成为:每1L反硝化培养液中,含有以下组分:CH3COONa,2g;KH2PO4,0.4g;MgSO4·7H2O,0.6g;CaCl2·2H2O,0.07g;KNO3,1g;Tris缓冲液12mL;微量元素2mL;余量为水;pH值为7.0~7.2。制备时,将各组分混合混匀,调节pH值至7.0~7.2(氢氧化钠溶液或盐酸调节),110℃高压灭菌20min,即得。
优选的,所述微量元素是由以下组分组成的:EDTA50.0g,ZnSO42.2g,CaCl25.5g,MnCl2·4H2O5.06g,FeSO4·7H2O5.0g,(NH4)6Mo7O2·4H2O1.1g,CuSO4·7H2O1.57g,CoCl2·6H2O1.61g,蒸馏水1000ml,制备时,将各组分混合混匀,即得。
所述混合菌群微生物制剂可以用于处理污水,可以加强秋季人工湿地处理受污染河水及城镇生活污水的能力,通过填料、植物和微生物之间的相互作用,经吸附、离子?#25442;弧?#26893;物吸收和微生物?#21040;?#31561;过程,可有效提高受污染河水以及城镇生活污水中污染物的去除效?#30465;?#20855;体应用时,方法为:将本发明的混合菌群微生物制剂投加到秋季人工湿地系统(?#28909;?#31179;季 芦苇人工湿地系统)中,加入量为污水体积的1%;处理时间(污水在潜流人工湿地中的水力停留时间)为7天或7天以上。经检测,采用本发明的混合菌群微生物制剂处理污水7天后,处理后的受污染河水出水COD、总氮、总磷的含量达到《地表水环?#25345;?#37327;标准》(GB3838-2002)Ⅲ类水?#26102;?#20934;,处理后的城镇生活污水出水COD、氨氮和总磷的含量指标达到《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB18918-2002)一级B标准。
所述秋季人工湿地的结构为:包括基体,基体高600~650mm,?#26412;?50~500mm,蓄水量约为20L。基体内距基体底端50mm处安装有出水管,出水管上设有用于控制的阀门和出水口。基体内安装有水位控制管,以用于控制湿地中的受处理污水的水位。基体上方设有进水管,进水管上设有进水口,用于向湿地中注入自来水或受处理污水。基体内?#19978;?#21040;上依次设有碎石层、细?#23433;?#21644;土壤层,其中,碎石层由粒径10~20mm的碎石填充而成,厚度为250~300mm;细?#23433;?#30001;粒径1~2mm的细砂填充而成,厚度为50-100mm;土壤层由土壤填充而成,厚度为100-150mm。土壤层上种植有根际微生物丰富的芦苇。芦苇苗自三?#36335;?#31181;植入人工湿地系统中,每隔2天用革兰氏营养液(现有技术中已有的常规产品)进行浇灌,一个月后,开始浇灌自来水(?#23665;?#27700;口流入湿地系统),每2天换水一次,换水时,打开阀门,由出水口排出。处理污水时,换受处理污水进行浇灌。
所述基体为PVC材料的圆柱体。
本发明的发明人经反复研究和实践,发现:将由类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)、施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)、假产碱假单胞菌(Pseudomonas pseudoalcaligenes)和食油假单胞菌(Pseudomonas oleovorans)组成的混合菌群微生物制剂投加到人工湿地系统中,可增加根?#37322;?#27694;菌群的数量,强化秋季湿地中微生物的作用,可以有效提高受处理污水中污染物的去除效率,处理后的受污染河水出水COD、总氮、总磷的含量可达到《地表水环?#25345;?#37327;标准》(GB3838-2002)Ⅲ类水?#26102;?#20934;,处理后的城镇生活污水出水COD、氨氮和总磷的含量指标可达到《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB18918-2002)一级B标准。
附图说明
图1:本发明用以处理受污染河水及城镇生活污水的小型人工湿地装置图。
其中,1、进水口;2、受处理污水;3、土壤层;4、细沙层;5、砾石层;6、芦苇;7、水位观测管;8、阀门;9、出水口。
图2:混合菌群微生物制剂强化秋季芦苇人工湿地处理受污染河水中的COD效果图。
图3:混合菌群微生物制剂强化秋季芦苇人工湿地处理受污染河水中的总氮效果图。
图4:混合菌群微生物制剂强化秋季芦苇人工湿地处理受污染河水中的总磷效果图。
图5:混合菌群微生物制剂强化秋季芦苇人工湿地处理城镇生活污水的COD效果图。
图6:混合菌群微生物制剂强化秋季芦苇人工湿地处理城镇生活污水中的氨氮效果图。
图7:混合菌群微生物制剂强化秋季芦苇人工湿地处理城镇生活污水中的总磷效果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。实施例用于说明本发明,而不是限定本发明。
实施例1制备混合菌群微生物制剂
制备方法如下:
将斜面保存的类芽孢杆菌用接?#21482;?#21038;取1环菌苔,接种至200mL反硝化培养液中,30~35℃,180r/min,摇床震荡培养24h,获得活化的菌株培养?#28023;?#33740;株培养液在8000r/min下离心20min,去上清液获得菌体细胞,用无菌水稀释成1.5g湿菌体/L的菌悬?#28023;?#24471;类芽孢杆菌菌悬?#28023;?#21516;样的方法制备得到施氏假单胞菌菌悬液、假产碱假单胞菌菌悬液和食油假单胞菌菌悬?#28023;?#23558;四种菌悬液等体积量混合,混匀,即得混合菌群微生物制剂,经检测,混合菌群微生物制剂中,类芽胞杆菌活菌数为3.6×108CFU/ml,施氏假单胞菌活菌数为4.2×108CFU/ml,假产碱假单胞菌活菌数为4.0×108CFU/ml,食油假单胞菌活菌数为3.4×1010CFU/ml。
所述类芽孢杆菌,保藏编号为CCTCC NO:M2011120,分类命名为:Paenibacillussp.XP1,保藏日期为2011年4月10日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072。
所述施氏假单胞菌,保藏编号为CCTCC NO:M2011431,分类命名为Pseudomonas stutzeriXP2,保藏日期为2011年11月27日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072。
所述假产碱假单胞菌,保藏编号为CCTCC NO:M2012225,分类命名为Pseudomonas pseudoalcaligenes CL-1,保藏日期为2012年6月13日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072。
所述食油假单胞菌,保藏编号为CCTCC NO:M2012226,分类命名为Pseudomonas oleovorans CL-3,保藏日期为2012年6月13日,保藏单位为:中国典型培养物保藏中心,保藏地址为:中国.武汉.武汉大学,?#26102;?30072。
所述反硝化培养液的组成为:每1L反硝化培养液中,含有以下组分:CH3COONa,2g;KH2PO4,0.4g;MgSO4·7H2O,0.6g;CaCl2·2H2O,0.07g;KNO3,1g;Tris缓冲液12mL;微量元素2mL;余量为水;pH值为7.0。制备时,将各组分混合混匀,调节pH值至7.0(氢 氧化钠溶液或盐酸调节),110℃高压灭菌20min,即得。
所述微量元素是由以下组分组成的:EDTA50.0g,ZnSO42.2g,CaCl25.5g,MnCl2·4H2O5.06g,FeSO4·7H2O5.0g,(NH4)6Mo7O2·4H2O1.1g,CuSO4·7H2O1.57g,CoCl2·6H2O1.61g,蒸馏水1000ml,制备时,将各组分混合混匀,即得。
实施例2混合菌群微生物制剂在加强秋季人工湿地处理受污染河水的能力中的应用
如图1所示,小型人工湿地的结构为:包括基体(为PVC材料圆柱体),高600~650mm,?#26412;?50~500mm,蓄水量约为20L。基体内距基体底端50mm处安装有出水管,出水管上设有用于控制的阀门8和出水口9。基体内安装有水位控制管7,以用于控制湿地中的受处理污水2的水位。基体上方设有进水管,进水管上设有进水口1,用于向湿地中注入自来水或受处理污水。基体内?#19978;?#21040;上依次设有碎石层5、细?#23433;?和土壤层3,其中,碎石层5由粒径10~20mm的碎石填充而成,厚度为250~300mm;细?#23433;?由粒径1~2mm的细砂填充而成,厚度为50-100mm;土壤层3由土壤填充而成,厚度为100-150mm。土壤层3上种植有根际微生物丰富的芦苇6。芦苇苗自三?#36335;?#31181;植入人工湿地系统中,每隔2天用革兰氏营养液(现有技术中已有的常规产品)进行浇灌,一个月后,开始浇灌自来水(?#23665;?#27700;口1流入湿地系统),每2天换水一次,换水时,打开阀门8,由出水口9排出。实验启动期前一个月,换受处理污水进行浇灌,每2天换水一次,等待实验开始。
实验:秋季(9~11?#36335;?,对上述小型芦苇湿地进行混合菌群微生物强化处理受污染河水实验,当地气温在12~20℃。实验启动后,将实施例1制备的混合菌群微生物制剂按1%(体积百分数)的?#22756;?#25237;加于人工湿地中,在运行过程中,平均每天?#26377;?#22411;湿地最下端出水管处采取水样,污水在小型人工湿地内停留7天。同时,以不加混合菌群微生物制剂为对照组。
具体处理效果见图2、图3、图4。混合菌群强化芦苇湿地与对照组相比,对COD的去除效果明显(见图2),加菌实验组第7天时,CODcr为16.2mg/L(≤20mg/L),去除率达到75.7%,水质达到《地表水环?#25345;?#37327;标准》(GB3838-2002)Ⅲ类水?#26102;?#20934;(CODcr≤20mg/L)。对照组CODcr在第7天时仍未达标。图3显示,实验过程中芦苇加菌强化湿地中TN浓度?#27663;?#26174;著?#26723;?#30340;趋势,与对照组相?#26579;?#26377;更优的去除效果。第7天时,TN浓度为0.6mg/L(≤1.0mg/L),去除率达到96.65%,达到《地表水环?#25345;?#37327;标准》(GB3838-2002)Ⅲ类水?#26102;?#20934;(TN≤1.0mg/L)。而对照组的去除率仅为38.5%。混合菌群的加入,对秋季芦苇湿地强化城镇生活污水脱氮起到了显著的效果。图4显示,加菌组与对照组相比,TP浓度显著?#26723;汀?#31532;7天时,加菌组的TN浓度为0.15mg/L(<0.2mg/L),去除率达到90.4%,达到《地表水环?#25345;?#37327;标准》 (GB3838-2002)Ⅲ类水?#26102;?#20934;(TP≤0.2mg/L),混合菌群的加入强化了芦苇湿地对受污染河水中TP的去除。
实施例3混合菌群微生物制剂在加强秋季人工湿地处理城镇生活污水的能力中的应用
秋季(9~11?#36335;?对小型芦苇湿地(实施例2中的)进行混合菌群微生物强化处理城镇生活污水实验,当地气温在12~20℃。实验启动后,将活化的混合菌群微生物制剂按1%的?#22756;?#25237;加于人工湿地中,在运行过程中,平均每天从各小型湿地最下端出水管处采取水样,污水在小型人工湿地内停留7天。同时,以不加混合菌群微生物制剂为对照组。
具体处理效果见图5、图6、图7。混合菌群强化芦苇湿地与对照组相比,对COD的去除效果明显(见图5),加菌实验组第4天时,CODcr为55mg/L(≤60mg/L),去除率达到67.6%,水质达到《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB18918-2002)一级B标准(CODcr≤60mg/L)。第7天时,加菌组去除率为85.3%,对照组去除率63.5%。对照组CODcr在第7天时达标。图6显示,实验过程中芦苇加菌强化湿地中NH3-N浓度?#27663;种?#28176;?#26723;?#30340;趋势,与对照组相?#26579;?#26377;更优的去除效果。第7天时NH3-N浓度降至6.2mg/L(≤8mg/L),去除率达到87.4%,水质达到《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB18918-2002)一级B标准(NH3-N≤8mg/L)。而对照组去除率为52.64%,未达标。图7显示,加菌强化实验组与对照组相比,TP浓度显著?#26723;停?#31532;7天时,TN浓度为0.4mg/L(<0.5mg/L),去除率达到88.9%,水质达到《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB18918-2002)一级B标准要求(TP≤0.5mg/L)。而对照组的TP去除率为65%,未达标。
综合实施例2、3,表明,本发明中应用的装置操作简单,运行过程中无需曝气,充分利用了微生物的良好作用,即能达到排放标准,可以有效节省工艺运行成本。通过投加混合菌群对秋季人工湿地进行生物强化,水力停留时间7天时,受处理污水的COD、N、P含量指标达到《地表水环?#25345;?#37327;标准》(GB3838-2002)Ⅲ类水?#26102;?#20934;或《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB18918-2002)一级B标准。

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本文标题:混合菌群微生物制剂及其在处理污水中的应用.pdf
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