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电子标签亲和配体库及用途.pdf

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电子标签 亲和 配体库 用途
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摘要
申请专利号:

CN201310178037.9

申请日:

2013.05.14

公开号:

CN104156739A

公开日:

2014.11.19

当前法律状态:

实审

有效性:

审中

法?#19978;?#24773;: 实质审查的生效IPC(主分类):G06K 17/00申请日:20130514|||专利申请权的转移IPC(主分类):G06K 17/00变更事项:申请人变更前权利人:马贵军变更后权利人:上海亨臻实业有限公司变更事项:地址变更前权利人:200240 上海市闵行区东川路800号生科楼4--409变更后权利人:200131 上海市浦东新区自由贸?#36164;?#39564;区富特东一路458号5层518?#19994;?#35760;生效日:20141105|||公开
IPC分类号: G06K17/00; C40B40/10; C40B20/04; C40B50/00; C07K1/22 主分类号: G06K17/00
申请人: 马贵军
发明人: 马贵军; 李荣秀; 马国荣; 叶龙
地址: 200240 上海市闵行区东川路800号生科楼4--409
优?#28909;ǎ?/td>
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

CN201310178037.9

授权公告号:

||||||

法律状态公告日:

2016.06.01|||2014.12.03|||2014.11.19

法律状态类型:

实质审查的生效|||专利申请权、专利权的转移|||公开

摘要

本发明涉及一种电子标签亲和配体库、构建方法和用途;提供了基于配体结构信息的电子标签化技术、配体在标签封装材料上的合成技术、靶生物分子标记、无标记筛选技术,用于快速、特异、高通量筛选靶生物分子的亲和配体;本发明的电子标签配体库针对靶生物分子筛选的亲和配体可以用于研发蛋白纯化的亲和材料、疾病?#26800;?#25233;制剂和药物的非?#24067;?#32467;合长效制剂辅料。

权利要求书

权利要求书
1.  一种电子标签亲和配体库,其特征在于每个配体的结构信息储存于电子标签中,方便能够快速直接读取。

2.  根据权利要求1所述的电子标签亲和配体库,其特征在于电子标签具备信息读取、写入和擦除功能,工作方式含通过射频读、写码器进行。

3.  根据权利要求1所述的电子标签亲和配体库,其特征在于电子标签由耐有机溶剂的材料封装,包括但不限于无机材料如玻璃、高分子材料如聚丙烯。

4.  根据权利要求1所述的电子标签亲和配体库,其特征是所述的亲和配体包括但不限于本发明中所列举的有机化合物在电子标签封装材料表面单个化合物直接化学固定和通过多活性基团骨架分步组合固定多?#21482;?#21512;物合成复杂结构配体。

5.  根据权利要求4所述的亲和配体库合成方法,其特征是多活性基团骨架包括不限于三?#28909;?#27694;嗪、多肽固相合成。

6.  根据权利要求1所述的电子标签配体库,其特征在于构建步骤包括但不限于电子标签玻璃管的表面功能化处理、活化反应、电子标签玻璃管的读、写编码和小分子配基的?#21058;?#21453;应。

7.  根据权利要求1所述的电子标签亲和配体库,其特征在于筛选目标分子的亲和配体,筛选时目标分子可以用荧光素,酶,放射性同位素标记,也可以是非标记的天然蛋白质或基因工程表达的融合蛋白。

8.  根据权利要求1所述的电子标签亲和配体库,其特征在于所筛选的亲和配体用于发展目标分子的分离纯化材料。

9.  根据权利要求1所述的电子标签亲和配体库,其特征在于所筛选的亲和配体用于研发目标分子的抑制剂。

10.  根据权利要求1所述的电子标签亲和配体库,其特征在于所筛选的亲和配体用于研发目标分子的长效制剂辅料。

说明书

说明书电子标签亲和配体库及用途
技术领域
本发明涉及生物医药领域的亲和配体,具体涉及一种电子标签亲和配体库、构建方法和在生物医药中用途。
背景技术
药物分子与生物大分子(如蛋白质)的结合是具有良好生物利用度、代谢稳定性和低毒性的前提。寻?#19994;?#33021;够和生物靶分子高度亲和性和选择性结合的配体分子(通常称为亲和配体、先导化合物、lead compound)是新药研发的重要起步,也是制备生物靶分子亲和纯化分离材料的基础。为了能快速地研发靶分子亲和配体,近20多年来已经发展了许多方法,包括以结构为基础的分子设计和用生物靶分子筛选化合物库,如美国专利申请US20090240033A1“Affinity Matrix Library and Its Use”公布了在琼脂糖、硅胶、?#23435;?#32032;、玻璃、Toyopearl、Hydroxyethymethacrylate、Polyacrylamide、Hyper D、Stryrenedivinylbenzene或者Perfluorocarbons介质上合成的亲和配基库。在筛选亲和配体分子是,需要将每?#32440;?#36136;分别装层析柱,用样?#20998;?#20010;柱子进行亲和层析操作,评估纯化效果;筛选亲和配体需要的样品量多,操作过程繁琐、时间长、人力物力需求大。因此,需要建立操作简单、时间短、速度快、高通量高的针对生物靶分子的亲和配体库以及筛选?#20302;場?
发明内容
本发明利用电子芯片作为亲和配体结构信息存储和读取的电子标签,在包裹封装材料上合成亲和配体库、利用靶生物分子(标记和无标记)进行筛库,挑选能够和靶分子结合的亲和配体,读出芯片中亲和配体分子结构信息,组成一种快速、高通量亲和配体筛选?#20302;場?#30005;子标签通过封装,如玻璃管封装,对封装材料表面基团进行功能化衍生、活化,直接用化学反应?#24067;叟剂?#37197;基分子,和/或通过多活性位点的骨架分子分步?#21058;?#22810;?#22336;?#23376;合成亲和配体库。在筛选阶段,利用天然或基因工程表达蛋白的标记和/或无标记筛选,快速筛选到能够结合靶生物分子的亲和配体。筛选过程操作简单、快速。
因此,本发明的一个目的在于构建一个电子标签亲和配体库,亲和配体信息存储在配体所在的电子标签中;
本发明的另一个目的在于建立用生物分子快速筛选电子标签亲和配体的方法,靶生物分子(标记和/或无标记)样品与亲和配体库孵育,读取每个亲和配体标签上的靶生物分子信号、挑出信号最高的亲和配体标签,用?#21015;?#22120;直接阅读配体结构信息,从而实现快速、高通量靶生物分子特异的亲和配体筛选。
本发明的再一个目的是筛选天然蛋白或基因工程表达蛋白的亲和配体,发展亲和纯化分离材料和纯化工艺。
本发明中,所述的亲和配体库是在内置电子标签的玻璃封装管表面化学?#21058;?#23567;分子配体化合物、配体化合物含有多种功能基团、构成多种特异空间构象、可特异性结合多种蛋白,包括:以具有读、写功能的电子标签用玻璃管为封装基质,并对玻璃管表面进行功能化处理,及?#21058;?#21644;原位合成多?#32440;?#26500;的小分子配基化合物,构成亲和配体库,可以用于高通量、规模化的蛋白筛选。
本发明中所述的?#26800;?#30333;亲和配体的高通量、快速筛选,和亲和材料的制备、分离与纯化方法的建立,包括标记和/或无标记?#26800;鞍子?#20146;和配体库的孵育、洗涤、阳性标签的挑选,配体结构信息的读取,以及标签的洗脱再生;
本发明中所述的筛选方法在标记或无标记的天然蛋白或基因工程表达蛋白筛选、分离与纯化?#26800;?#24212;用,是用少量?#26800;?#30333;纯品与亲和配体库?#26800;?#30005;子标签玻璃管孵育,用荧光信号或其它非标记信号挑选吸附?#26800;?#30333;阳性信号电子标签玻璃管,读取亲和配体的结构信息;
本发明中所述的?#26800;?#30333;的亲和层析方法是根据筛选得到的亲和配体信息在层析介质上?#21058;?#21644;/或合?#19978;?#24212;的亲和配体,用于蛋白的快速筛选及分离与纯化。
这种小分子仿生亲和配基比天然生物分子性质更稳定,特异性及重复性更好,尤为突出的一个优点是:可一次性合成大量的小分子化合物的配体库,用于蛋白质的筛选、分离与纯化。
附图说明
图1是实施例三仿生亲和材料纯化抗体的SDS-PAGE电泳图
图2是实施例三仿生亲和材料纯化蛋白A的SDS-PAGE电泳图
表1,100×100电子(标签)玻璃管小分子配体编号及属性列(表)
本发明是通过以下技术方案实现的,具体包括如下步骤:
步骤一:电子标签亲和配体库的构建:包括将一定数量的电子标签玻璃管与活化试剂置于低温环境下搅拌1-12小时,反应过程中用酸或碱性试剂调节反应液pH5-10,用有机溶剂或水清洗电子标签玻璃管2-20次,剔除未结合活化试剂,最后将电子标签玻璃管浸泡于10%-30%的乙醇或丙酮的水溶?#28023;?#20302;温保存待用。
将功能化反应的可?#21015;?#20108;维数码的电子标签按实验设计的规则进行写与读的操作,使每个电子标签玻璃管具有相应的独立的编号;根据拟构建配体库的大小,将一定数量的电子标签玻璃管分装在特定浓度的配(体)反应液的容器中。固定在立式旋转烘箱中,调节温度为20-55℃,转速为5-100rpm,反应5-48小时,并用酸或碱性溶液调节反应液的Ph 值至pH5-9。待反应结束后用乙醇,丙酮,DMF(N’N-二甲基甲酰胺)或水?#28909;薌料?#28068;电子标签玻璃管5-20次,除去未结合的游离的小分子配基。
?#30740;础?#35835;和?#21058;?#20102;第一个小分子配基的电子标签玻璃管,只需对其第二个可读、写编码区的数?#32440;?#34892;读与写操作。
将一定数量的?#38597;剂?#31532;一个小分子配基且完成第二个小分子配基编号的电子标签玻璃分组后分装在内含一定浓度的特定配基溶液的容器中,固定在立式旋转烘箱中,调节烘箱温度至45-98(85-95)℃,转速为10-200rpm,反应24-72小时,反应过程中每4-8小时测定反应液的pH值,并用酸或碱性溶液调节至pH5-10;待反应结束后冷却至室温。用乙醇、丙酮,DMF(N’N-二甲基甲酰胺)或其他有机溶剂或水洗涤电子标签玻璃管5-20次,除去未结合的游离的小分子配基。最后将电子标签玻璃管浸泡于5-20%的乙醇、N’N二甲基甲酰胺或丙酮的水溶液中,低温保存待用。
步骤二:本发明中,所述的蛋白质的高通量、快速筛选,分离与纯化方法的建立;它包括?#26800;?#30333;的?#27573;?#20026;标记、非标记的天然蛋白或基因工程表达蛋?#23376;肱剂?#26377;不同配体电子标签玻璃管在4-70℃下孵育0.1-6h,用pH3-12的离子浓度为0.005-2M的缓冲液漂洗未结合的蛋白,挑出蛋白信号最强的10个标签、读取配体结构信息。测定标签上
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步阐述,以下实施方式只以举例的方式描述本发明。很明显,本领域普通技术人员可在本发明的?#27573;?#21644;实质内,对本发明进行各种变通和修改。需要?#31169;?#30340;是,本发明意欲涵盖在所附权利要求书中包括的变通和修改。
实施例一:
高通量仿生亲和配体库的构建
电子标签芯片上的可读、写码区由一个10位数的条码?#21015;?#21306;,和一个4位数的的条码?#21015;?#21306;组成。本配体库用第一个10位数的条码?#21015;?#21306;记录,用射频?#21015;?#22120;写与读的操作。编码和信息写入规则:第一个10位数读、写码区的第0位数?#30452;?#31034;配体库的构建批次第1次小分子配体库的构建信息用写入1。对氨基化合物?#26469;?#25353;照从001号起始至100号编号,作为第一个功能基团?#21058;?#33267;电子标签时,化合物编码写入第一条码?#21015;?#21306;最后的第6-9位;当作为第二个功能基团?#21058;?#33267;电子标签时,化合物编码写入第二条码?#21015;?#21306;的第1-3位,第0位写入1。
将20000只电子标签玻璃管(1.5mm×7mm),第1位写入1,代表第1批次合成双基团配体。装入2L的锥型塑料瓶中,加入500ml无水甲苯和7.5mmol3-氨基丙基三甲氧基硅烷和92.5mmol的正硅酸四乙酯试剂,50℃搅拌反应24h,冷却倾去反应?#28023;?#29992;无数乙醇洗 涤10次,用20%乙醇保存备用。
配制浓度为0.5mg/ml的三?#28909;?#27694;嗪(C3N3Cl3)-丙酮溶液1000ml,置于-20冰箱预冷1小时后,将10000个待活化电子标签玻璃管装入含冷丙酮溶液的塑料瓶中,置于4℃搅拌器上反应5分钟后,将配制好的0.5mg/ml的三?#28909;?#27694;嗪(C3N3Cl3)-丙酮溶液加入塑料瓶中,使三?#28909;?#27694;嗪(C3N3Cl3)终浓度为0.1mg/ml,搅拌20分钟后测定溶液pH值,并不断用饱和Na2CO3溶液调节三?#28909;?#27694;嗪(C3N3Cl3)-丙酮溶液pH值为pH7-8,继续在搅拌器上搅拌反应4.5小时后,用蒸馏水洗涤电子标签玻璃管10次,得活化的电子标签(玻璃管)4℃冰箱中保存待用。
对氨基化合物?#26469;?#25353;照从001号起始至100号编号;取100个电子标签,把1001写入电子标签第一条码?#21015;?#21306;的第2-4位,然后装入100ml的?#36879;呶滤?#26009;瓶,加入配制好的1号小分子氨基化合物溶?#28023;?#23494;封固定在搅拌反应箱中,在50℃搅拌反应24小时,实验反应过程中,前8小时左右,每2小时测量一次反应液的pH值,用饱和Na2CO3溶液(水为溶剂的反应液)维持pH7-10。待反应结束后用丙酮、DMF(溶于有机溶剂的含氨基的小分子配基)或水?#26469;?#27927;涤电子标签玻璃管5-15次。洗涤过程中?#31185;?#30005;子标签玻璃管单独洗涤,避免混合;4℃保存待用;?#26469;?#23545;其余氨基化合物编号,写入各批次电子标签,合?#19978;?#24212;结构写入电子标签的配体,合成上相应化合物,得所有化合物?#21058;?#30340;电子标签子库。
从已经?#21058;?#31532;一个化合物的电子标签字库中各取一个,共100个电子标签,把001写入电子标签第一条码?#21015;?#21306;的第5-7位,然后装入100ml的?#36879;呶滤?#26009;瓶,加入配制好的1号小分子氨基化合物溶?#28023;?#23494;封固定在搅拌反应箱中,在95℃搅拌反应24小时,实验反应过程中,前8小时左右,每2小时测量一次反应液的pH值,用饱和Na2CO3溶液(水为溶剂的反应液)维持pH7-10。待反应结束后用N’N-二甲基甲酰胺和水?#26469;?#27927;涤电子标签玻璃管5-15次。洗涤过程中?#31185;?#30005;子标签玻璃管单独洗涤,避免混合;4℃保存待用;继续从已经?#21058;?#31532;一个化合物的电子标签字库中各取一个,共100个电子标签,?#26469;?#23558;其余氨基化合物编号写入各批次电子标签,合?#19978;?#24212;化合物,电子标签配体库1。
实施例二:
高通量仿生亲和配体库的构建
将300只电子标签玻璃管(1.5mm×7mm),第1位写入2,代表第2批次合成单基团配体。装入500mL的锥型塑料瓶中,加入200ml无水甲苯和7.5mmol2,3-?#36153;?#22522;丙基三甲氧基硅烷和92.5mmol的正硅酸四乙酯试剂,50℃搅拌反应24h,冷却倾去反应?#28023;?#29992;无数乙醇洗涤10次,用20%乙醇保存备用。
每次取3个电子标签,第一条码?#21015;?#21306;的第2-4位写入001,然后装入50ml的?#36879;呶滤?料瓶,加入配制好的1号小分子氨基化合物溶?#28023;?#23494;封固定在搅拌反应箱中,在60℃搅拌反应24小时,实验反应过程中,前8小时左右,每2小时测量一次反应液的pH值,用饱和Na2CO3溶液(水为溶剂的反应液)维持pH7-10。待反应结束后用DMF和水?#26469;?#27927;涤电子标签玻璃管5-15次。洗涤过程中?#31185;?#30005;子标签玻璃管单独洗涤,避免混合;4℃保存待用;?#26469;?#23558;其余氨基化合物编号写入各批次电子标签,合?#19978;?#24212;结构的化合物,得所有化合物?#21058;?#30340;电子标配体库2。
实施例三:
电子标签亲和配体库在蛋白纯化?#26800;?#24212;用
将人血清免疫球蛋白IgG共11.8mg(5ml,2.36mg/ml)用PBS(0.01M PB+0.15M NaCl,pH7.4)缓冲?#21512;?#37322;至浓度为1.2mg/ml,4℃冷柜内的磁力搅拌器上搅拌5~10分钟,取FITC(异硫氰酸荧光素)0.12mg与待标记抗体进行标记反应:将秤取的FITC荧光素缓慢加入稀释后的抗体中,在10分钟内全部加入,搅拌15h,12000g离心10min,除去少量沉淀物,将标记的抗体溶液装入透析袋中,用0.01M PBS(0.01M PB+0.15M NaCl,pH7.4),在4℃透析过夜,最后用SepHadex G-25脱盐柱过滤除掉游离荧光素,收集标记的荧光抗体。
将人血浆蛋?#23376;?.01M PBS(0.15M NaCl,pH7.4)稀释至浓度为3mg/ml,与相应浓度的FITC标记的蛋?#35013;?#29031;已标记IgG∶人血浆=1∶9的比例配制的混合物;
从电子标配体库1中取出200个电子标签玻璃管,置于100ml塑料瓶中,加入30ml的已配制含FITC标记IgG的人血浆蛋白,在4℃条件下,轻微震荡孵育30min,然后取出IgG样品,加30ml 0.01M PBS(0.01M PB+0.15M NaCl,pH7.4)?#33014;?#32531;冲液在室温下轻微震荡10min,取出?#33014;?#32531;冲?#28023;?#37325;复此操作10次。最后将电子标签玻璃管置于荧光酶标板内,经保鲜膜包裹后,置于FLA-5100多功能扫描仪进行荧光?#19978;?#25195;描(激发光473nm,吸收光532nm,分辨率为100um),电子标签玻璃管的荧光值扫描与数据处理和分析。
将荧光值高的电子标签玻璃管挑选出,分别选用pH10和pH3的盐离子浓度为1-1.5M的洗涤缓(冲液)震荡洗涤20min,重复此操作两次,分别收集两次洗涤后的电子标签玻璃管进行二次荧光扫描,剔除荧光值高的电子标签玻璃管,保留荧光?#21040;?#20302;电子标签玻璃管,并读取电子标签玻璃管的配基信息,为(1000000079,1039,),(1000000079,1074),(1000000027,1049),相应结构分别为十一胺和4-(2?#24065;一?-苯磺酰胺,L-丝氨酸和4-(2?#24065;一?-苯磺酰胺,2,4,6-三氨基嘧啶和?#21494;?#33018;组成的双基团配体。在后续合成验证时分别标记为仿生亲和配基7,仿生亲和配基11和仿生亲和配基14。
Sepharose 6B用三?#28909;?#27694;嗪活化(操作参照《亲和色谱导论》(洛(C.R.Lowe)著;刘毓秀译.科学出版社,1983年5月第1版),量取3份各50ml,估算三氮嗪摩尔数,分别称取 5倍摩尔过量的氨基化合物(R1)4-(2?#24065;一?-苯磺酰胺,4-(2?#24065;一?-苯磺酰胺,?#21494;?#33018;,溶解于100ml量的蒸馏水、DMF中,分别加入三氮嗪活化介质中,混匀在50℃搅拌反应24h,反应过程中饱和NaHCO3溶液维持pH在7-8,反应完成后取出,?#26469;?#29992;10倍体积DMF(N’N二甲基甲酰胺)和水洗涤介质。
再分别称取5倍摩尔过量的氨基化合物(R2)十一胺,L-丝氨酸,2,4,6-三氨基嘧啶,溶解于100ml量的蒸馏水、DMF中,分别加入,已经?#21058;?-(2?#24065;一?-苯磺酰胺,4-(2?#24065;一?-苯磺酰胺,?#21494;?#33018;的三氮嗪活化介质,混匀,95℃搅拌反应24小时,反应过程用饱和NaHCO3维持pH在7.0-8.0之间,反应完成后取出?#26469;?#29992;10倍体积DMF(N’N二甲基甲酰胺)和水洗涤介质,得仿生亲和介质7,仿生亲和介质11和仿生亲和介质14。用体积分数为20%的乙醇保存待用。
分别取仿生亲和介质7,仿生亲和介质11和仿生亲和介质14各2ml分别填装10ml塑料层析柱中,并在重力柱外壁标记,用10ml PB(10mM,pH7.4)缓冲液?#33014;?#21508;仿生亲和层析柱。将0.01M PBS缓冲液10?#26029;?#37322;人血浆蛋白样品,取2ml上样到各亲和柱,用20ml0.01M的PB溶液?#33014;猓?#26368;后用10ml的50mMGly-HCl(pH3)和0.1N NaOH溶?#21512;?#33073;吸附蛋白,用12%SDS-PAG(E)胶电泳检测与分析仿生亲和分离材料对人血浆中IgG抗体的吸附效果。仿生亲和材料7,11和14从人血清样?#20998;?#29305;异性分离纯化IgG抗体的纯度分别为95%,91%和86%。
实施例?#27169;?
取蛋白A20mg用20ml PBS(0.01M PB+0.15M NaCl,pH7.4)缓冲液溶解,加FITC(异硫氰酸荧光素)0.15mg溶解后混合,4℃搅拌15h;取出装入透析袋中,用0.01M PBS(0.01M PB+0.15M NaCl,pH7.4),在4℃透析过夜,收集荧光标记蛋白A。
从电子标配体库1中取出500个电子标签玻璃管,置于200ml塑料瓶中,加入50ml荧光标记蛋白A(0.1mg/ml),在4℃条件下,轻微震荡孵育30min,然后取出电子标签玻璃管用0.01M PBS(0.01M PB+0.15M NaCl,pH7.4)缓冲?#21512;?#28068;10次。最后将电子标签玻璃管置于荧光酶标板内,经保鲜膜包裹后,置于FLA-5100多功能扫描仪进行荧光?#19978;?#25195;描(激发光473nm,吸收光532nm,分辨率为100um),电子标签玻璃管的荧光值扫描与数据处理和分析。
将荧光值高的电子标签玻璃管挑选出,分别选用pH10和pH3的盐离子浓度为1-1.5M的洗涤缓震荡洗涤20min,重复此操作两次,分别收集两次收集洗涤后的电子标签玻璃管进行二次荧光扫描,剔除荧光值高的电子标签玻璃管,保留荧光?#21040;?#20302;电子标签玻璃管,并读取电子标签玻璃管的配基信息,为(1000000002,0000),(1000000031,0000), (1000000065,0000),相应结构分别为正辛胺和组胺单基团配体。在后续合成验证时分别标记为仿生亲和配基CL3和仿生亲和配基CL31。
Sepharose 6B用三?#28909;?#27694;嗪活化(操作参照《亲和色谱导论》(洛(C.R.Lowe)著;刘毓秀译.科学出版社,1983年5月第1版),量取3份各50ml,估算三氮嗪摩尔数,分别称取5倍摩尔过量的氨基化合物(R1)正辛胺,组胺和苯氨基甲酰肼,溶解于100mlDMF中,分别加入三氮嗪活化介质中,混匀在50℃搅拌反应24h,反应过程中饱和NaHCO3溶液维持pH在7-8,反应完成后取出?#26469;?#29992;10倍体积DMF(N’N二甲基甲酰胺)和水洗涤介质。得仿生亲和介质CL3和仿生亲和介质CL31,用体积分数为20%的乙醇保存待用。
分别取仿生亲和介质CL3和仿生亲和介质CL31各2ml分别填装10ml塑料层析柱中,并在重力柱外壁标记,用10ml PB(10mM,pH7.4)缓冲液?#33014;?#21508;仿生亲和层析柱。取2ml大肠杆菌发酵重组表达的蛋白A样品(按照中国专利申请:201110087262.2制备)上样到各亲和柱,用20ml 0.01M的PB溶液?#33014;猓?#26368;后用10ml的50mMGly-HCl(pH3)和0.1N NaOH溶?#21512;?#33073;吸附蛋白,用12%SDS-PAG(E)胶电泳检测与分析仿生亲和分离材料纯化蛋白A的效果。仿生亲和介质CL3和仿生亲和介质CL31纯化蛋白A的纯度分别为96%,97%。
表1
标码1标码2中文名称10000000011001对氨基苯乙酮10000000021002正辛胺100000000310039-氨基吖啶一水氢氯化物100000000410041-氨基蒽醌10000000051005二正乙胺100000000610062-氨基-1,4-二?#20154;?2氨基对苯二甲酸)10000000071007对氨基苯甲酸10000000081008己胺10000000091009N-(3-氨基丙基)咪唑100000001010101-氨基1-氢?#20154;?/ENTRY>100000001110112-氨基苯并咪唑10000000121012盐酸酪胺10000000131013间苯二?#36153;?#37240;盐10000000141014腺嘌呤10000000151015吖啶黄(氮嗯黄)10000000161016间氨基酚10000000171017盐酸氨基葡糖
10000000181018羟基丁二酰?#21069;?/ENTRY>10000000191019L-?#35013;?#37240;10000000201020L-酪氨酸10000000211021三?#35013;?/ENTRY>10000000221022L-苏氨酸10000000231023L-天门冬酰胺10000000241024L-甲硫氨酸10000000251025L-天冬酸10000000261026二氨基苯甲酸100000002710272,4,6-三氨基嘧啶100000002810282,6-二氨基蒽醌100000002910291,5-二氨基蒽醌100000003010306-氨基正己酸10000000311031二盐酸组胺10000000321032苯乙胺10000000331033二氨基苯并噻唑100000003410344,4’-二氨基二苯醚100000003510351,2-环己二胺10000000361036对氨基苯磺酸10000000371037邻硝基苯胺100000003810382-氨基对苯二甲酸10000000391039十一胺100000004010404-氨基水杨酸钠10000000411041环己胺10000000421042三环葵胺10000000431043丙烯胺100000004410441-天冬氨酸1000000045XX045对苯二胺10000000461046邻苯二胺10000000471047盐酸硫胺100000004810483-吡啶?#35013;?/ENTRY>10000000491049?#21494;?#33018;10000000501050L-缬氨酸10000000511051L-?#34507;?#37240;10000000521052二苯胺
10000000531053L-谷氨酸单钠盐10000000541054N-苯基邻氨基苯甲酸10000000551055环庚?#21069;?/ENTRY>100000005610564-氨基二苯甲酮100000005710575-氨基-2,2,4-三甲基-1-环戊基?#35013;?/ENTRY>10000000581058氨基二苯甲烷10000000591059氨基比林10000000601060N,N-二?#19968;?,4苯二胺100000006110614-氨基苯甲醛100000006210622-萘胺-1-磺酸Tobias acid(托拜厄斯酸)100000006310631-氨基蒽醌100000006410644,4二氨基二苯胺硫化物10000000651065苯氨基甲酰肼100000006610661-氨基-2-萘酚-4-磺酸100000006710673-氨基三氟甲苯100000006810682,6-二氨基吡啶10000000691069正丁胺10000000701070三乙胺10000000711071苯胺100000007210723-氨基,1-丙醇10000000731073糠胺10000000741074L-丝氨酸10000000751075乙?#21450;?/ENTRY>100000007610764-异丙基苯胺10000000771077N′N二异丙基乙胺10000000781078对苯二胺100000007910794-(2?#24065;一?-苯磺酰胺10000000801080苄胺10000000811081十二胺10000000821082盐酸二乙胺10000000831083二苄胺10000000841084二异丙胺10000000851085二正丁胺10000000861086二异丁胺10000000871087叔辛胺
100000008810883-?#24065;一?#22055;啶10000000891089L-组氨酸10000000901090环十二烷基胺10000000911091十八胺10000000921092L-精氨酸100000009310935-氨基间苯二甲酸10000000941094L-谷氨酸钠10000009510954-氨基-1,8-萘二酰?#21069;?/ENTRY>10000009610964-吗啉丙胺10000000971097戊胺,100000009810984-氨基-1-萘酚盐酸盐10000000991099对氨基苯甲醚100000010011001-氨基-5-萘酚

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