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一株高原黑木耳菌株.pdf

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高原 黑木耳 菌株
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摘要
申请专利号:

CN201310278146.8

申请日:

2013.07.04

公开号:

CN104145709A

公开日:

2014.11.19

当前法律状态:

授权

有效性:

有权

法?#19978;?#24773;: 授权|||实质审查的生效IPC(主分类):A01G 1/04申请日:20130704|||公开
IPC分类号: A01G1/04 主分类号: A01G1/04
申请人: 黑龙江大学
发明人: 张彦龙; 刘振东; 雷虹; 王静; 赵丹丹; 孙越; 曾伟民
地址: 150080 黑龙江省哈尔滨市南岗区学府路74号
优?#28909;ǎ?/td>
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

CN201310278146.8

授权公告号:

||||||

法律状态公告日:

2016.09.07|||2014.12.17|||2014.11.19

法律状态类型:

授权|||实质审查的生效|||公开

摘要

一株高原黑木耳菌株,它涉及一株黑木耳菌株。它为黑木耳HDXZ-1(Auricularia?auricular?HDXZ-1),保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC?NO:M2013032。本发明应用于黑木耳栽培领域。

权利要求书

权利要求书
1.  一株高原黑木耳菌株,它为黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1),保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M2013032。

说明书

说明书一株高原黑木耳菌株
技术领域
本发明涉及一株黑木耳菌株。
背景技术
黑木耳是一类营腐生生活的食用真菌,在生长发育的两个阶段靠菌丝体深入基质中,降解基质?#26800;?#26377;机物吸收被释放出的营养元素来提供自身的营养和繁殖需求。黑木耳是我国的传统食用菌,被誉为“植物肉、素中之荤?#20445;?#26377;人体清道夫之称,是人们生活?#26800;?#20581;康食品。
西藏黑木耳是青藏高原山珍?#26800;?#26497;品,是生长在朽木上的一种腐生真菌,由菌丝体和子实体组成。西藏独特环?#31243;?#20214;赋予了高原黑木耳营养价值高、价格昂贵等特点;但也因为西藏特殊的地理环境,如紫外光照高、森?#21482;?#36136;环境不同导致高原当地木耳产量普遍较低,也使得内地的优秀木耳?#20998;?#22312;西藏“水土?#29615;保分省?#21475;?#26800;?#26377;明显下降。
发明内容
本发明提供了一株适合在高原环?#31243;?#20214;下种植的黑木耳,其在高原地区种植产量高、商品性能好,综合性能优于内地移植?#20998;幀?
本发明黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1),保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:M2013032。
在西藏种植本发明黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1),每个菌袋(菌袋规格为Φ16.5cm×33cm,接种块为1cm×2cm×2cm)的产量干重达48.7±0.26g,与种植在内地平原地区(黑龙江东宁)的黑29(每个菌袋产量干重为50.3±0.29g)和元宝2号(每个菌袋产量干重为49.7±0.31g)产量基本相?#20445;?#26159;移植到西藏地区的黑29(每个菌袋产量干重为40.6±0.31g)的1.2倍,是元宝2号(每个菌袋产量干重为45.7±0.28g)的1.1倍,具有产量高的优点。
本发明黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)具有口感好,优于内地移植木耳的特点。
本发明黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)的栽培季节与传统的农忙时间不冲突,使广大农牧民在农闲时有事可做,有钱可赚。采用袋料栽培不?#21152;?#32789;地,滩涂、沙石地均可栽培,这样可有效地扩大土地使用面积。通过栽培黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)可?#26685;?#21152;高原地区农牧民的收入,20万袋需用地20亩,预估可收获干耳约1.9万 余斤,根据每袋原材料成本1.2元,人工成本1元,每斤售价150元,能带来241万元的纯收入,有利于当地?#26408;?#27982;发展。
黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)为木耳(Auricularia auricula),属于木耳属(Auricularia);保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏地址是武汉大学,保藏日期为2013年1月21日,保藏编号为CCTCC NO:M2013032。
附图说明
图1是选取黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)同源性在99%以上的真菌构建系统发育树。
图2是具体实施方式二中硬度对比试验结果图。
图3是具体实施方式二?#26800;?#24615;对比试验结果图。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以?#28388;?#21015;举具体实施方式,还包括各具体实施方式间的?#25105;?#32452;合。
具体实施方式一:本实施方式黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1),保藏在中国典型培养物保藏中心,保藏日期为2013年1月21日,保藏编号为CCTCC NO:M2013032。
黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)采集自西藏米林县南伊沟景区,海拔2800m,木耳基物为青冈树,采集人为刘振东,采集时间为2010年。
黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)经形态学初步鉴定为黑木耳。
将采集到的黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)标本除去污物,用高锰酸钾-甲醛溶液进行熏蒸处理30min,然后将子实体放置于超净工作台上进?#24418;?#33740;分离(用接菌铲取子实体的胶质部分),将分离出来的胶质部分(黄豆粒大小)接种到PDA培养基中央在25℃恒温培养箱中培养15天后挑取菌落边缘的尖端菌丝体,并且移植到试管培养基(1L试管培养基由200g去皮马铃薯、20.0g葡萄糖、3.0g KH2PO4、1.5g MgSO4、14.0g琼脂、75g麦麸和余量的水组成)斜面中央在25℃条件下培养至菌丝长满斜面,如此重复3次。纯化后?#26408;纸?#20837;装有木屑培养基(装有木屑培养基由40%的干料与60%的水组成,干料按质量百分比由78%的阔叶硬杂木木屑、20%的麦麸或米糠、1%的石膏和1%的白砂糖组成)组成的试管中保藏。
拮抗试验:
将黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)与对照木耳菌株(木耳?#20998;?#40657;29、 元宝2号以及在西藏波密县才采集获得的另一黑木耳菌株西藏8号——西藏8号采集自西藏波密县,海拔2900m,木耳基物为桦树,采集人为张彦龙,采集时间为2010年,现保藏于黑龙江大学211实验室,并对公众发放提供),两两组合进行菌株独立性检验,分别接种?#38454;?#26377;PDA培养基的试管两端,每个组合做3个重复。接种标记序号后25℃条件下恒温培养,每隔12h观察一次,及时发?#26893;?#24323;掉被杂菌污?#38236;?#35797;管,更换新的试管斜面重新接菌培养。待管内菌株菌丝接触后,观察菌丝接触部位、菌丝的亲和程度及拮抗线形成情况并记录,具体形态特征隆起、隔离型、沟型参照《GB/T12728食用菌术语》的规定来判定;以“-”表示亲和、“+”表?#38745;?#20146;和但无明显拮抗线、“++”表?#38745;?#20146;和且有明拮抗线。拮抗试验结果如表1所示。
表1拮抗反应结果
菌株黑29元宝2号西藏8号黑木耳HDXZ-1++++
菌丝长势、长速对比试验(试验在西藏地区进行):
黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)按照一级菌种:二级菌种:三级菌种=1:7:560的比例进行接种(1个一级菌?#32440;?#31181;7个二级培养基,1个二级菌?#32440;?#31181;80个三级培养基)。一级菌种每个菌?#32440;?支试管(一级菌种用PDA培养基),二级菌种(二级菌种培养基按质量百分比由40%的干料与60%的水组成,干料按质量百分比由78%的阔叶硬杂木木屑、20%的麦麸或米糠、1%的石膏和1%的白砂糖组成)与三级菌种(三级菌种培养基按质量百分比由38%的干料与62%的水组成,干料按质量百分比由76%的青冈木屑、22%的青稞麸皮、1%的石膏和1%的石灰组成)分别接种100袋和300袋,设置3个重复。
(1)首先在超净工作台内将黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)接种于PDA试管斜面中央,置于25℃恒温培养箱内培养,观察黑木耳HDXZ-1在室温下生长情况,如菌丝粗壮、浓密程度、颜色等。
(2)将黑木耳HDXZ-1在接菌箱内接种二级菌,然后将二级菌?#22336;?#20837;预先用菌室消毒王灭菌的培养室内培养(接菌口朝上立放),首先在29℃环境下培养,待菌?#27542;?#26009;后改为25℃培养,待菌丝铺满整个料面后,观察各菌株?#26408;?#19997;生长情况如菌丝粗壮、浓密程度、颜色等。
(3)按照无菌操作规程在接菌桌上接种黑木耳HDXZ-1的三级菌(接种块大小为1cm×2cm×2cm),然后将三级菌种横放在培养架上(接菌口处留?#23454;?#30340;空隙)在20℃环?#25345;?#22521;养,每天无风时开门通气1h。待菌丝铺满料面?#20445;?#38543;机选取10袋,每隔2天对走菌长度进行一次标记,同时观察菌丝长势,测量其长度并记?#30002;?#28385;时间,计算日均菌丝生长速度,并 进行方差分析。
黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)各级菌种生长情况如表2所示。
表2   各级菌种生长情况

说明黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)菌丝生长旺盛、菌丝粗壮、洁白、长势好。
表3    三级菌培养基上的生长速度(mm)

高原栽培出耳试验:
在西藏林芝地区进行高原栽培出耳试验,栽培培养基(菌袋)由水?#36879;?#26009;混合而成,水与干料质量比为38:62,干料按照质量百分比由76%的青冈木屑、22%的青稞麸皮、1%的石膏和1%石灰组成;栽培菌袋养菌期间温度为20℃;栽培培养基运用简易灭菌锅在高原地区灭菌的灭菌时间为9h;选择4月上旬?#26685;?#22521;菌袋进行下地栽培管理;在黑木耳田间管理阶段,最佳划口形状为“∣”型,最佳划口数量为140。
将长满菌袋的黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)下地管理,观察菌种的出耳情况,杂菌污染情况,采耳后对子实体的商品性能进行比较分析,随机抽取10袋记录子实体的产量。
表4菌株产量情况

表5高原栽培商品性能
菌株子实体颜色朵型开片情况口感黑木耳HDXZ-1腹面漆黑背面褐色碗状开片、小根软滑
黑木耳HDXZ-1的商品性能符合优秀黑木耳商品的要求。
将黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)菌株的ITS序列提交到NCBI中,运用BLAST程序与GenBank已收录的序列库进?#22411;?#28304;性比较,下载MEGA5.0选取同源性在 99%以上的真菌构建系统发育树(如图1所示),通过系统进化树可知,黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)菌株与数据库?#26800;?#40657;木耳菌株428为主的亚群处在同一分支上,由?#19997;?#20197;确定黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)为木耳属黑木耳种。
黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)与黑木耳菌株428比较,区别如表6所示。
表6
菌株黑木耳HDXZ-1黑木耳菌株428菌丝萌发温度18℃21℃最适生长PH7.57.3最适生长温度25℃-28℃23℃-26℃生长最适含水量60%-62%62%-65%子实体商品性能小根碗状小根单片袋菌产量48g47g
黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)水浴中复水60min,用吸水纸吸干表面水分,复水率为90%。黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)复水之前耳块较小较碎,颜色灰暗无光泽;复水后,耳片较薄,呈深褐色无光泽,弹?#36234;?#22909;,劲道爽滑性一般,整体口感不错。
具体实施方式二:本实施方式对黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)、内地优秀木耳?#20998;?#20197;及移植到西藏种植的内地优秀木耳?#20998;纸?#34892;对比试验:
1号样品是黑龙江东宁黑木耳,为东宁县必德金食用菌研究所分离得到的黑木耳元宝2号;
2号样品是黑龙江东宁黑木耳,为东宁县必德金食用菌研究所分离得到的黑木耳A4;
3号样品是移植到西藏种植的元宝黑木耳2号;
4号样品是移植到西藏种植的黑木耳A4;
5号样品是黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)。
1、硬度对比试验结果如图2所示,说明移植到西藏种植的内地木耳?#20998;?#30828;度显著增加,且明显大于黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1),口感显著下降。
2、弹性对比试验结果如图3所示,说明移植到西藏种植的内地木耳?#20998;值?#24615;显著下降,也低于黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1),口感差。
3、黑木耳常量营养成分检测结果如表7所示,黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)即5号样品的水分和蛋白质含量高于其他4个样品,?#31181;?#32938;、还原糖和总糖含量则 明显低于其他4个样品,黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)更符合当今高蛋白高膳食?#23435;?#20302;脂肪摄入的饮食理念。
表7黑木耳样?#20998;?#24120;量营养成分表(单位:g/100g)
 12345水分8.29±0.05b8.49±0.03b8.34±0.04b8.02±0.07b9.36±0.1a灰分5.51±0.03a5.45±0.01a5.18±0.04b5.28±0.06b5.13±0.05b蛋白质13.5±0.34b13.7±0.46b13.4+0.35b13.3±0.26b15.1±0.12a粗?#23435;?/ENTRY>5.4+0.1c5.8±0.02c9.3±0.08a9.1±0.03a8.1±0.12b?#31181;?#32938;0.55±0.007b0.52±0.008b0.7±0.01a0.67±0.002a0.31±0.005c总糖55.8±1.3b57.3±1.1b68.6±1.4a64.7±1.15a46.7±1.55c还原糖13.7±0.21b14.9±0.31b19.6±0.46a18.3±0.5a4.5±0.1c
3、矿物质元素及部分重金属含量检测
测定方法:采用NY/T1653-2008?#26800;?#30005;感耦合等离子发射光谱法,测定黑木耳样?#20998;械?#30719;物质元素及部分重金属元素。检测条件:载气流速15L/min,辅助气流速0.2L/min,泵流速1.5mL/min,观测方式为轴向,延迟时间15秒。
检测结果如表8所示,Ca和Mg在黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)?#26800;?#21547;量最高,分析Ca和Mg在黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)中含量高不但有西藏当地环境因素,黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)对Ca和Mg的吸收能力也强于其他4个样品。
P在黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)?#26800;?#21547;量最高,而移植?#20998;?号和4号样品较低,说明虽然培养环?#25345;蠵含?#24247;停?#40657;木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)对P具有较好的吸收?#36879;?#38598;能力。
试验说明黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)对K元素的吸收能力明显优于3号和4号样品。
试验说明西藏地区环?#25345;衂n含量较高,黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)具有平衡Zn含量的作用和效果。
Na在黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)?#26800;?#21547;量最低。
重金属Cr和Pb在黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)?#26800;?#21547;量最低,虽然西藏高原环?#25345;?#37325;金属Cr和Pb的含量高,但是黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)能够有效的避免这两种对人体有害重金属的吸收。
Na和K的摄入需维持平衡才能对人体健康;Ca、Zn、P均为骨细胞结构和功能的必需 元素,促进骨的形成;Mg是生理生化反应中多种酶的激活?#31890;?#24182;且Mg还具有调节肌肉兴奋性的作用;而Cr和Pb是对人体有害的重金属。所以,可以看出黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)是一?#36136;?#21512;在西藏高原地区推广的种植,且矿物元素含量合理的黑木耳菌株。
表8木耳样?#20998;?#30719;物质元素及重金属元素含量(μg/g)
名称12345Ca3186±563245±654157±484229±364407±37Zn1.12±0.220.05±0.0123.1±0.7424.6±0.435.12±0.21P3187±153223±273019±273089±263658±23K12612±8512481±10110841±6311089±7412151±67Na1993±231960±171307±271249±12889±15Mg1021±121323±281697±371773±352113±28Cr36.8±1.2335.8±1.0151.2±1.5652.8±1.0330.4±1.4Pb1.02±0.20.84±0.13.49±0.263.89±0.50.45±0.1As0.47±0.10.37±0.05---
4、维生素含量检测
黑木耳HDXZ-1(Auricularia auricular HDXZ-1)VB2含量最高。

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