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组织培养快速繁育朱蕉的方法.pdf

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组织培养 快速 繁育 方法
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摘要
申请专利号:

CN201910100246

申请日:

20190131

公开号:

CN109588318A

公开日:

20190409

当前法律状态:

公开

有效性:

审中

法?#19978;?#24773;: 公开
IPC分类号: A01H4/00 主分类号: A01H4/00
申请人: 上海上房园艺有限公司
发明人: 申瑞雪;李蓉;黄建荣;庞玉华
地址: 201114 上海市闵行区浦江镇浦江村
优先权:
专利代理机构: 31225 代理人: 褚明伟
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法律状态
申请(专利)号:

CN201910100246

授权公告号:

法律状态公告日:

20190409

法律状态类型:

公开

摘要

本发明涉及一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,包括:(1)无菌材料的获得;(2)芽的?#21482;?#21644;增殖;(3)生根培养;(4)炼苗与移栽。与现有技术相比,本发明采用组培快速繁育的方法,可以在短时间内获得大量株型整齐,性状优良的植株,以满足市场的大量需求。

权利要求书

1.一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,其特征在于,包括以下步骤: (1)无菌材料的获得 在春季3月采集朱蕉母本上带茎尖的幼嫩茎段,洗涤干净后,用1‰升汞浸泡,无菌水冲洗,将茎尖切成小段,接种于茎尖诱导培养基上; (2)芽的?#21482;?#21644;增殖 小芽接种于茎尖诱导培养基上15天后,小芽基部开始膨大,25天可见明显的愈伤组织,培养30天,切带小芽的愈伤组织放入不定芽增殖培养基培养; (3)生根培养 取不定芽增殖培养基中幼苗,切取生长健壮的小植株,转接入生根培养基中诱导生根,25天后幼苗基部?#21482;?#20986;许多白色的根原基,35天后长至1-2cm,生根率为95%; (4)炼苗与移栽 根系长至2-3cm时,选择根系发达生长健壮的无菌苗,在温度14-16℃、自然光照和湿度的室内放置一周后,取出小苗洗净根部琼脂,移栽到苗床上,种好的小苗浇透水,大棚每天要打开,保持足够通风,注意土壤干时适当浇水,移栽成活率可达95%。 2.根据权利要求1所述的一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,其特征在于,步骤(1)中,选择?#20998;?#32431;正、植株粗?#22330;?#38271;势良好、无病虫害的优良朱蕉植株为朱蕉母体。 3.根据权利要求1所述的一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,其特征在于,步骤(1)中,洗涤的方法为:将采集的外植体在流水下进行冲洗,清洁外植体表面的?#39029;荊?#20877;用肥皂水进行洗涤,洗涤时晃动瓶子,使外植体充分接触肥皂水;洗涤完成后用流水冲洗干净。 4.根据权利要求1所述的一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述茎尖诱导培养基含有大量元素、铁盐、肌?#32908;?#26377;机物质、微量元素、6-BA、NAA, 所述大量元素含量为0.4423g/L、铁盐含量为0.0651g/L、肌醇含量为0.01g/L、有机物质含量为0.031g/L、微量元素含量为0.2708g/1000L、6-BA含量为2.0mg/L、NAA含量为0.2mg/L; 所述大量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:KNO3、NH4NO3、MgSO4、CaCl2、KH2PO4;所述铁盐是FeSO4·7H2O;所述有机物质包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:盐酸?#28860;?#36763;、盐酸硫胺素、甘氨酸、烟酸;所述微量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·5H2O; 所述茎尖诱导培养基pH为5.8,所述茎尖诱导培养基中加入蔗糖30g/L,加入琼脂3g/L,所述茎尖诱导培养基培养温度为21-23℃,光照为1800-2200Lx。 5.根据权利要求1所述的一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述不定芽增殖培养基含有大量元素、铁盐、肌?#32908;?#26377;机物质、微量元素、6-BA、NAA, 所述大量元素含量为0.4423g/L、铁盐含量为0.0651g/L、肌醇含量为0.01g/L、有机物质含量为0.031g/L、微量元素含量为0.2708g/1000L、6-BA含量为0.2mg/L、NAA含量为0.1mg/L, 所述大量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:KNO3、NH4NO3、MgSO4、CaCl2、KH2PO4;所述铁盐是FeSO4·7H2O;所述有机物质包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:盐酸?#28860;?#36763;、盐酸硫胺素、甘氨酸、烟酸;所述微量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·5H2O; 所述不定芽增殖培养基pH为5.8,所述不定芽增殖培养基中加入蔗糖30g/L,加入琼脂3g/L,所述不定芽增殖培养基培养温度为21-23℃,光照为1800-2200Lx。 6.根据权利要求1所述的一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,其特征在于,步骤(3)中,所述生根培养基含有大量元素、铁盐、肌?#32908;?#26377;机物质、微量元素、NAA, 所述大量元素含量为0.4423g/L、铁盐含量为0.0651g/L、肌醇含量为0.01g/L、有机物质含量为0.031g/L、微量元素含量为0.2708g/1000L、NAA含量为0.1mg/L; 所述大量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:KNO3、NH4NO3、MgSO4、CaCl2、KH2PO4;所述铁盐是FeSO4·7H2O;所述有机物质包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:盐酸?#28860;?#36763;、盐酸硫胺素、甘氨酸、烟酸;所述微量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、H3BO3、KI、Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCl2·5H2O; 所述生根培养基pH为5.8,所述生根培养基中加入蔗糖30g/L,加入琼脂3g/L,所述生根培养基培养温度为21-23℃,光照为1800-2200Lx。 7.根据权利要求1所述的一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,其特征在于,步骤(4)中,苗床上的基质为草炭与珍珠岩体积比1:1的混合物, 基质搅拌均匀后平铺在苗床,平铺厚度为18-22cm,铺好的基质上撒上500倍液的敌磺钠药水消毒。 8.根据权利要求1所述的一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,其特征在于,步骤(4)中,?#28006;?#26102;用工具插孔,然后用镊子将小苗舒展根系后植入,种植深度以基质盖住幼苗基部不露根。 9.根据权利要求1所述的一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,其特征在于,步骤(4)中,每星期要打一?#25105;?#27700;,多菌灵和陶氏益农-大生M45交替使用,以防止出现抗药性,晴天减少次数。

说明书


组织培养快速繁育朱蕉的方法
技术领域


本发明涉及一种植物繁育方法,尤其是涉及一种组织培养快速繁育朱蕉的方法。


?#23576;?#25216;术


朱蕉(学名:Cordyline fruticosa(L.)A.Cheval)为龙舌兰科、朱蕉属直立灌?#23616;?br>物,高1-3?#20303;?#33550;粗1-3厘米,有时稍分枝。?#27602;?#29983;于茎或枝的上端,绿色或带紫红色,叶柄有
槽,抱茎。圆锥花序侧枝基部有大的苞片;花淡红色、青紫色至黄色;花梗通常很短;外?#21482;?br>?#40644;?#19979;半部紧贴内轮而形成花被筒,上半部在盛开时外弯或反折;雄蕊生于筒的喉部,稍短
于花被;花柱细长。花期11月至?#25991;?月。


中国专利CN107182787A公开了一种朱蕉组培繁育方法,包括:步骤一:培养瓶消
毒;步骤二:接?#26893;?#26009;的选择;步骤三?#21644;?#26893;体的构建;步骤四:培养基的配置;步骤五:组培
步骤,包括A、丛生芽诱导;B、继代增殖培养;C、壮苗培养;D、生根培养;步骤六:瓶苗移栽。该
方法适用于规模化、标准化生产;?#26723;?#29983;产成本10%以上;移栽成活率达到90%以上。


红巨人朱蕉为朱蕉的一种特殊?#20998;郑?#40857;舌兰科朱蕉属的常绿灌木,株高2m左右,观
叶,常绿,叶披针形?#26009;?#24615;,长30-90cm,终年紫红色。红巨人朱蕉耐荫性强,颜色亮丽,在园
林景观配置和室内盆栽观赏等方面有较多应用,市场需求量大。红巨人朱蕉采用扦插等繁
殖方式,繁殖系数和成活?#35782;?#24456;低。


《植物生理学通讯》2010年12期的?#40644;?#25991;章“新西兰朱蕉‘红巨人’的组织培养和快
速繁殖”(作者李新国、娄玉?#32908;?#37073;志仁,来自上海师范大学生命与环境科学学院)介绍了新
西兰朱蕉‘红巨人’的组织培养和快速繁殖方法,培养条件以MS为基本培养基。(1)芽诱导培
养基:MS+6-BA 2.0mg·L~(-1)(单位下同)+NAA 0.2;(2)继代增殖培养基:MS+6-BA 1.0+
NAA 0.1;(3)生根培养基:1/2MS+NAA 0.05。上述培养基均添加3%蔗糖和0.6%琼脂,pH
5.8~6.0。培养温度为(23+2)℃。


发明内容


本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种组织培养快速
繁育朱蕉的方法。


本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:


一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,包括以下步骤:


(1)无菌材料的获得


在春季3月采集朱蕉母本上带茎尖的幼嫩茎段,洗涤干净后,于超净工作台上,用
1‰升汞浸泡15min,无菌水冲洗5-6次,将茎尖切成1cm长的小段,接种于茎尖诱导培养基
上;


(2)芽的?#21482;?#21644;增殖


小芽接种于茎尖诱导培养基上15天后,小芽基部开始膨大,25天可见明显的愈伤
组织,培养30天,切带小芽的愈伤组织放入不定芽增殖培养基培养,基部愈伤组织比较多,
但不影响不定芽的增殖,不定芽生长迅速,无玻璃化现象,在该培养中生长发育良好;


(3)生根培养


取不定芽增殖培养基中幼苗,切取生长健壮的小植株,转接入生根培养基中诱导
生根,25天后幼苗基部?#21482;?#20986;许多白色的根原基,35天后可以长至1-2cm,在MS+NAA0.1中,
根系粗壮,须根众多,生根率为95%;


(4)炼苗与移栽


生根培养40天左右,根系长至2-3cm时,选择根系发达生长健壮的无菌苗,在温度
14-16℃、自然光照和湿度的室内放置一周后,取出小苗洗净根部琼脂,移栽到苗床上,?#28006;?br>?#26412;?#37327;避免损伤根系,洗净生根苗后即可进行?#28006;玻?#31181;好的小苗浇透水,晴天时需要加盖遮
阴网,防止灼伤,大棚每天要打开,保持足够通风,注意土壤干时适当浇水,移栽成活率可达
95%。


步骤(1)中,选择?#20998;?#32431;正、植株粗?#22330;?#38271;势良好、无病虫害的优良朱蕉植株为朱蕉
母体。


步骤(1)中,洗涤的方法为:将采集的外植体在流水下进行冲洗,清洁外植体表面
的?#39029;荊?#20914;洗时间为10min;再用肥皂水进行洗涤15min,洗涤时晃动瓶子,使外植体充分接
触肥皂水;洗涤完成后用流水冲洗干净。


步骤(1)中,所述茎尖诱导培养基含有大量元素、铁盐、肌?#32908;?#26377;机物质、微量元素、
6-BA、NAA,


所述大量元素含量为0.4423g/L、铁盐含量为0.0651g/L、肌醇含量为0.01g/L、有
机物质含量为0.031g/L、微量元素含量为0.2708g/1000L、6-BA含量为2.0mg/L、NAA含量为
0.2mg/L。


所述大量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:KNO
3、NH
4NO
3、MgSO
4、CaCl
2、KH
2PO
4;
所述铁盐是FeSO
4·7H
2O;所述有机物质包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:盐酸?#28860;?#36763;、盐酸硫
胺素、甘氨酸、烟酸;所述微量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:MnSO
4·4H
2O、ZnSO

7H
2O、H
3BO
3、KI、Na
2MoO
4·2H
2O、CuSO
4·5H
2O、CoCl
2·5H
2O;


所述茎尖诱导培养基pH为5.8,所述茎尖诱导培养基中加入蔗糖30g/L,加入琼脂
3g/L,所述茎尖诱导培养基培养温度为21-23℃,光照为1800-2200Lx。


步骤(2)中,所述不定芽增殖培养基含有大量元素、铁盐、肌?#32908;?#26377;机物质、微量元
素、6-BA、NAA,


所述大量元素含量为0.4423g/L、铁盐含量为0.0651g/L、肌醇含量为0.01g/L、有
机物质含量为0.031g/L、微量元素含量为0.2708g/1000L、6-BA含量为0.2mg/L、NAA含量为
0.1mg/L,


所述大量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:KNO
3、NH
4NO
3、MgSO
4、CaCl
2、KH
2PO
4;
所述铁盐是FeSO
4·7H
2O;所述有机物质包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:盐酸?#28860;?#36763;、盐酸硫
胺素、甘氨酸、烟酸;所述微量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:MnSO
4·4H
2O、ZnSO

7H
2O、H
3BO
3、KI、Na
2MoO
4·2H
2O、CuSO
4·5H
2O、CoCl
2·5H
2O;


所述不定芽增殖培养基pH为5.8,所述不定芽增殖培养基中加入蔗糖30g/L,加入
琼脂3g/L,所述不定芽增殖培养基培养温度为21-23℃,光照为1800-2200Lx。


步骤(3)中,所述生根培养基含有大量元素、铁盐、肌?#32908;?#26377;机物质、微量元素、NAA,


所述大量元素含量为0.4423g/L、铁盐含量为0.0651g/L、肌醇含量为0.01g/L、有
机物质含量为0.031g/L、微量元素含量为0.2708g/1000L、NAA含量为0.1mg/L;


所述大量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:KNO
3、NH
4NO
3、MgSO
4、CaCl
2、KH
2PO
4;
所述铁盐是FeSO
4·7H
2O;所述有机物质包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:盐酸?#28860;?#36763;、盐酸硫
胺素、甘氨酸、烟酸;所述微量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:MnSO
4·4H
2O、ZnSO

7H
2O、H
3BO
3、KI、Na
2MoO
4·2H
2O、CuSO
4·5H
2O、CoCl
2·5H
2O;


所述生根培养基pH为5.8,所述生根培养基中加入蔗糖30g/L,加入琼脂3g/L,所述
生根培养基培养温度为21-23℃,光照为1800-2200Lx。


步骤(4)中,苗床上的基质为草炭与珍珠岩体积比1:1的混合物,


基质搅拌均匀后平铺在苗床,平铺厚度为18-22cm,铺好的基质上撒上500倍液的
敌磺钠药水消毒。


步骤(4)中,?#28006;?#26102;用工具插孔,然后用镊子将小苗舒展根系后植入,种植深度以
基质盖住幼苗基部不露根为宜。


步骤(4)中,由于下雨天土壤潮湿,小苗容易发霉死亡,所以每星期要打一?#25105;?#27700;,
多菌灵和陶氏益农-大生M45交替使用,以防止出现抗药性,晴天酌情减少次数。


本发明所提供的组织培养快速繁育朱蕉的方法,尤其适应于繁育红巨人朱蕉品
种。


与?#23576;?#25216;术中“新西兰朱蕉‘红巨人’的组织培养和快速繁殖”相比,本申请中增殖
培养基和生根培养基不同,用量更精准;环?#31243;?#20214;不同,pH值准确到5.8,温度?#27573;?#32553;小到
21-23℃,给出了光照条件为1800-2200Lx。培养出来的朱蕉小苗健壮,移栽成活率提?#21537;?br>5%。本发明采用组培快速繁育的方法,可以在短时间内获得大量株型整齐,性状优良的植
株,以满足市场的大量需求。


具体实施方式


下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。


一种组织培养快速繁育朱蕉的方法,包括以下步骤:


(1)无菌材料的获得


在春季3月采集朱蕉母本上带茎尖的幼嫩茎段,洗涤干净后,于超净工作台上,用
1‰升汞浸泡15min,无菌水冲洗5-6次,将茎尖切成1cm长的小段,接种于茎尖诱导培养基
上;


(2)芽的?#21482;?#21644;增殖


小芽接种于茎尖诱导培养基上15天后,小芽基部开始膨大,25天可见明显的愈伤
组织,培养30天,切带小芽的愈伤组织放入不定芽增殖培养基培养,基部愈伤组织比较多,
但不影响不定芽的增殖,不定芽生长迅速,无玻璃化现象,在该培养中生长发育良好;


(3)生根培养


取不定芽增殖培养基中幼苗,切取生长健壮的小植株,转接入生根培养基中诱导
生根,25天后幼苗基部?#21482;?#20986;许多白色的根原基,35天后可以长至1-2cm,在MS+NAA0.1中,
根系粗壮,须根众多,生根率为95%;


(4)炼苗与移栽


生根培养40天左右,根系长至2-3cm时,选择根系发达生长健壮的无菌苗,在温度
14-16℃、自然光照和湿度的室内放置一周后,取出小苗洗净根部琼脂,移栽到苗床上,?#28006;?br>?#26412;?#37327;避免损伤根系,洗净生根苗后即可进行?#28006;玻?#31181;好的小苗浇透水,晴天时需要加盖遮
阴网,防止灼伤,大棚每天要打开,保持足够通风,注意土壤干时适当浇水,移栽成活率可达
95%。


步骤(1)中,选择?#20998;?#32431;正、植株粗?#22330;?#38271;势良好、无病虫害的优良朱蕉植株为朱蕉
母体。


步骤(1)中,洗涤的方法为:将采集的外植体在流水下进行冲洗,清洁外植体表面
的?#39029;荊?#20914;洗时间为10min;再用肥皂水进行洗涤15min,洗涤时晃动瓶子,使外植体充分接
触肥皂水;洗涤完成后用流水冲洗干净。


步骤(1)中,所述茎尖诱导培养基含有大量元素、铁盐、肌?#32908;?#26377;机物质、微量元素、
6-BA、NAA,


所述大量元素含量为0.4423g/L、铁盐含量为0.0651g/L、肌醇含量为0.01g/L、有
机物质含量为0.031g/L、微量元素含量为0.2708g/1000L、6-BA含量为2.0mg/L、NAA含量为
0.2mg/L。


所述大量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:KNO
3、NH
4NO
3、MgSO
4、CaCl
2、KH
2PO
4;
所述铁盐是FeSO
4·7H
2O;所述有机物质包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:盐酸?#28860;?#36763;、盐酸硫
胺素、甘氨酸、烟酸;所述微量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:MnSO
4·4H
2O、ZnSO

7H
2O、H
3BO
3、KI、Na
2MoO
4·2H
2O、CuSO
4·5H
2O、CoCl
2·5H
2O;


所述茎尖诱导培养基pH为5.8,所述茎尖诱导培养基中加入蔗糖30g/L,加入琼脂
3g/L,所述茎尖诱导培养基培养温度为21-23℃,光照为1800-2200Lx。


步骤(2)中,所述不定芽增殖培养基含有大量元素、铁盐、肌?#32908;?#26377;机物质、微量元
素、6-BA、NAA,


所述大量元素含量为0.4423g/L、铁盐含量为0.0651g/L、肌醇含量为0.01g/L、有
机物质含量为0.031g/L、微量元素含量为0.2708g/1000L、6-BA含量为0.2mg/L、NAA含量为
0.1mg/L,


所述大量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:KNO
3、NH
4NO
3、MgSO
4、CaCl
2、KH
2PO
4;
所述铁盐是FeSO
4·7H
2O;所述有机物质包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:盐酸?#28860;?#36763;、盐酸硫
胺素、甘氨酸、烟酸;所述微量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:MnSO
4·4H
2O、ZnSO

7H
2O、H
3BO
3、KI、Na
2MoO
4·2H
2O、CuSO
4·5H
2O、CoCl
2·5H
2O;


所述不定芽增殖培养基pH为5.8,所述不定芽增殖培养基中加入蔗糖30g/L,加入
琼脂3g/L,所述不定芽增殖培养基培养温度为21-23℃,光照为1800-2200Lx。


步骤(3)中,所述生根培养基含有大量元素、铁盐、肌?#32908;?#26377;机物质、微量元素、NAA,


所述大量元素含量为0.4423g/L、铁盐含量为0.0651g/L、肌醇含量为0.01g/L、有
机物质含量为0.031g/L、微量元素含量为0.2708g/1000L、NAA含量为0.1mg/L;


所述大量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:KNO
3、NH
4NO
3、MgSO
4、CaCl
2、KH
2PO
4;
所述铁盐是FeSO
4·7H
2O;所述有机物质包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:盐酸?#28860;?#36763;、盐酸硫
胺素、甘氨酸、烟酸;所述微量元素包括以下物质中的一?#21482;?#20960;种:MnSO
4·4H
2O、ZnSO

7H
2O、H
3BO
3、KI、Na
2MoO
4·2H
2O、CuSO
4·5H
2O、CoCl
2·5H
2O;


所述生根培养基pH为5.8,所述生根培养基中加入蔗糖30g/L,加入琼脂3g/L,所述
生根培养基培养温度为21-23℃,光照为1800-2200Lx。


步骤(4)中,苗床上的基质为草炭与珍珠岩体积比1:1的混合物,


基质搅拌均匀后平铺在苗床,平铺厚度为18-22cm,铺好的基质上撒上500倍液的
敌磺钠药水消毒。


步骤(4)中,?#28006;?#26102;用工具插孔,然后用镊子将小苗舒展根系后植入,种植深度以
基质盖住幼苗基部不露根为宜。


步骤(4)中,由于下雨天土壤潮湿,小苗容易发霉死亡,所以每星期要打一?#25105;?#27700;,
多菌灵和陶氏益农-大生M45交替使用,以防止出现抗药性,晴天酌情减少次数。


本发明所提供的组织培养快速繁育朱蕉的方法,尤其适应于繁育红巨人朱蕉品
种。


上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。
熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各?#20013;薷模?#24182;把在此说明的一般
原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此,本发明不限于上述实施例,本领
域技术人?#22791;?#25454;本发明的揭示,不脱离本发明范畴所做出的改进和修改?#21152;?#35813;在本发明的
保护?#27573;?#20043;内。


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