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利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法.pdf

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利用 红曲 提取 培养 虫草 菌丝 方法
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摘要
申请专利号:

CN201910046307

申请日:

20190118

公开号:

CN109618815A

公开日:

20190416

当前法律状态:

公开

有效性:

审中

法?#19978;?#24773;: 公开
IPC分类号: A01G18/40;A01G18/20 主分类号: A01G18/40;A01G18/20
申请人: 福州隆利信生物制品有限公司
发明人: 朱?#24066;?
地址: 350500 福建省福州市连江县江南民营经济开发区
优先权:
专利代理机构: 33246 代理人: 裴金华
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法律状态
申请(专利)号:

CN201910046307

授权公告号:

法律状态公告日:

20190416

法律状态类?#20572;?/td>

公开

摘要

本发明公开了利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,通过天然发酵过的红曲提取残料,对虫草菌丝体的生长提供了必要的微量元素,以及易于菌丝体吸收同化的养分;通过维生素的添加可以增加虫草中虫草素的生产和积累;通过复合氨基酸的添加可以有效增加虫草内氨基的量,对腺苷和虫草素的合成起到促进作用;通过发酵可以使发酵液内的个营养组份充分的分解、?#21040;猓?#20351;其达到虫草菌丝体快速转化的目的;通过蓝、白光交替照射培养可以有效提高虫草菌丝内的多糖含量;通过对红曲提取残料的有效利用,减少了农业废料的处理成本。

权利要求书

1.利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,其特征在于:包括以下步骤: (1)、将红曲提取残料烘干、打粉,得到红曲米粉; (2)、按质量份将红曲米粉30-45份、葡萄糖10-15份、维生素7-10份、复合氨基酸3-6份、磷酸二氢钾0.5-1份、硫酸镁0.5-1份、酵母5-10份和水800-900份进行混合,并发酵2-3d,得到发酵液; (3)、将发酵液进行残渣过滤,收集滤液,将滤液倒入容器内密封,并放置到蒸汽灭菌柜中进行灭菌,温度为121℃,时间为30min,冷却后得到液体培养基; (4)、将虫草菌?#32440;?#31181;至液体培养基中,每次单体接种量为对应培养基重量的3%-5%,接种后进行摇床培养,培养温度为15-20℃,培养时间为8-12d,得到含有虫草菌丝的液体菌种。 2.如权利要求1所述的利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,其特征在于:所述红曲提取残料需先加入蛋白酶进行酶解后,进?#26800;?#30333;酶的灭活处理,蛋白酶灭活后再加入?#23435;?#32032;酶进行酶解。 3.如权利要求2所述的利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,其特征在于:所述红曲提取残料酶解后还需要加入果糖1-3份、淀粉1-3份和糖化酶1-2份。 4.如权利要求1所述的利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,其特征在于:所述维生素为维生素B1和B6,所述维生素B1和B6的质量比为1:1。 5.如权利要求1所述的利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,其特征在于:所述复合氨基酸按质量份包含精氨酸0.5-1份、赖氨酸0.5-1份、组氨酸0.5-1份、苏氨酸0.5-1份、天冬氨酸0.5-1份和丙氨酸0.5-1份。 6.如权利要求1所述的利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,其特征在于:步骤(3)和(4)中均需在无菌操作箱内进行无菌操作。 7.如权利要求1所述的利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,其特征在于:步骤(4)中培养的后4天进行光照培养。 8.如权利要求7所述的利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,其特征在于:光照培养为蓝光与白光交替照射培养,每日交替一次。 9.如权利要求8所述的利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,其特征在于:所述蓝光和白光均为冷光源。

说明书


利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法
技术领域


本发明涉及虫草人工培育技术领域,具体涉及利用利用红曲提取残料培养虫草菌
丝的方法。


背景技术


随着人们生活水平以及生活质量的不断提高,认识领域的不断扩大,对功能保健
产品以及食品的需求也日渐增大。虫草是一类具有显著保健疗效的药用和食用真菌,其中
最著名的是冬虫夏草,其相关的系列产品高达数十种,包括保健品、食品、中成药等?#22797;?#31867;
产品,在全世界都享有盛誉。但冬虫夏草寄主专一,生活环境?#37327;蹋?#32780;且由于其天然寄主蝙
蝠蛾生活周期长、天敌多、病害多,自然繁殖的幼虫产量严重不足,加之这些年来冬虫夏草
产区环境污染严重,人为过早、过量地滋采滋挖以及草甸沙化,从而造成未成熟的虫草菌感
染寄主的机会大量减少等原因,造成冬虫夏草数量和质量大幅度下降,货源稀?#20445;?#20215;格昂
贵,?#23545;?#19981;能满足市场日益增长的需求。


所以出现了大量的人工培育虫草涌向市场,但是在人工培育时,用于培养虫草菌
种的培养基无法达到天然野生虫草的生长环境,所以在菌丝体生长时无法获得充足的微量
元素、氨基酸和维生素等,从而导致人工培育虫草中的活性成分?#23545;?#23567;于天然野生虫草,无
法达到天然野生效果,?#32440;?#27573;对虫草的有效活性成分公认为是腺苷和虫草素,以及多糖。


发明内容


本发明的目的在于,针对上述现有技术的不足,提出利用红曲提取残料培养虫草
菌丝的方法,提供一种具有高效活性的虫草的人工培育方法。


本发明提出利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,包括以下步骤:


(1)、将红曲提取残料烘干、打粉,得到红曲米粉;


(2)、按质量份将红曲米粉30-45份、葡萄糖10-15份、维生素7-10份、复合氨基酸3-6份、
磷酸二氢钾0.5-1份、硫酸镁0.5-1份、酵母5-10份和水800-900份进行混合,并发酵2-3d,得
到发酵液;


(3)、将发酵液进行残渣过滤,收集滤液,将滤液倒入容器内密封,并放置到蒸汽灭菌柜
中进行灭菌,温度为121℃,时间为30min,冷却后得到液体培养基;


(4)、将虫草菌?#32440;?#31181;至液体培养基中,每次单体接种量为对应培养基重量的3%-5%,接
种后进行摇床培养,培养温度为15-20℃,培养时间为8-12d,得到含有虫草菌丝的液体菌
种。


进一步地,所述红曲提取残料需先加入蛋白酶进行酶解后,进?#26800;?#30333;酶的灭活处
理,蛋白酶灭活后再加入?#23435;?#32032;酶进行酶解。


进一步地,所述红曲提取残料酶解后还需要加入果糖1-3份、淀粉1-3份和糖化酶
1-2份。


进一步地,所述维生素为维生素B1和B6,所述维生素B1和B6的质量比为1:1。


进一步地,所述复合氨基酸按质量份包含精氨酸0.5-1份、赖氨酸0.5-1份、组氨酸
0.5-1份、苏氨酸0.5-1份、天冬氨酸0.5-1份和丙氨酸0.5-1份。


进一步地,步骤(3)和(4)中均需在无菌操作箱内进行无菌操作。


进一步地,步骤(4)中培养的后4天进行光照培养。


进一步地,光照培养为蓝光与白光交替照射培养,每日交替一次。


进一步地,所述蓝光和白光均为冷光源。


本发明提供的利用红曲提取残料培养虫草菌丝的方法,通过天然发酵过的红曲提
取残料,对虫草菌丝体的生长提供了必要的微量元素,以及易于菌丝体吸收同化的养分;通
过维生素的添加可以增加虫草中虫草素的生产和积累;通过复合氨基酸的添加可以有效增
加虫草内氨基的量,对腺苷和虫草素的合成起到促进作用;通过蓝、白光交替照射培养可以
有效提高虫草菌丝内的多糖含量;通过发酵可以使发酵液内的个营养组份充分的分解、降
解,使其达到虫草菌丝体快速转化的目的通过对红曲提取残料的有效利用,减少了农业废
料的处理成本。


具体实施方式


为下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发
明而不用于限制本发明的?#27573;А?#27492;外,本领域技术人员对本发明所做的各种改动或修改,这
些等价形?#37237;?#26679;落于本申请所要求保护的?#27573;?#20869;。本发明实施例中的配比均为以重量计。


实施例1


(1)、将红曲提取残料烘干、打粉,得到红曲米粉;


(2)、按质量份将红曲米粉30份、葡萄糖10份、维生素7份、复合氨基酸3份、磷酸二氢钾
0.5份、硫酸镁0.5份、酵母5份和水800份进行混合,并发酵2d,得到发酵液;


本实施例中的复合氨基酸按质量份包含精氨酸0.5份、赖氨酸0.5份、组氨酸0.5份、苏
氨酸0.5份、天冬氨酸0.5份和丙氨酸0.5份。


(3)、将发酵液进行残渣过滤,收集滤液,将滤液倒入容器内密封,并放置到蒸汽灭
菌柜中进行灭菌,温度为121℃,时间为30min,冷却后得到液体培养基;


(4)、将虫草菌?#32440;?#31181;至液体培养基中,每次单体接种量为对应培养基重量的3%,接种
后进行摇床培养,培养温度为15-20℃,培养时间为8d,后4天进行光照培养,得到含有虫草
菌丝的液体菌种;


(5)、将液体菌种通过注射器向无菌干燥的大麦虫内进行缓慢注射,注射点3-5个,注射
?#20102;?#20027;表面均潮湿后停止注射;


(6)、将培养宿主装置培养瓶中,进行无光黑暗培养30d,培养温度为15-20℃;再进行光
照培养35d,培养温度为26-30℃,即得到人工虫草。


实施例2


(1)、将红曲提取残料烘干、打粉,得到红曲米粉;


(2)、按质量份将红曲米粉37份、葡萄糖13份、维生素8份、复合氨基酸6份、磷酸二氢钾
0.7份、硫酸镁0.7份、酵母8份和水850份进行混合,并发酵3d,得到发酵液;


本实施例中的复合氨基酸按质量份包含精氨酸1份、赖氨酸1份、组氨酸1份、苏氨酸1
份、天冬氨酸1份和丙氨酸1份。


(3)、将发酵液进行残渣过滤,收集滤液,将滤液倒入容器内密封,并放置到蒸汽灭
菌柜中进行灭菌,温度为121℃,时间为30min,冷却后得到液体培养基;


(4)、将虫草菌?#32440;?#31181;至液体培养基中,每次单体接种量为对应培养基重量的4%,接种
后进行摇床培养,培养温度为15-20℃,培养时间为10d,后4天进行光照培养,得到含有虫草
菌丝的液体菌种;


(5)、将液体菌种通过注射器向无菌干燥的大麦虫内进行缓慢注射,注射点3-5个,注射
?#20102;?#20027;表面均潮湿后停止注射;


(6)、将培养宿主装置培养瓶中,进行无光黑暗培养30d,培养温度为15-20℃;再进行光
照培养35d,培养温度为26-30℃,即得到人工虫草。


实施例3


(1)、将红曲提取残料烘干、打粉,得到红曲米粉;


(2)、按质量份将红曲米粉45份、葡萄糖15份、维生素10份、复合氨基酸6份、磷酸二氢钾
1份、硫酸镁1份、酵母10份和水900份进行混合,并发酵3d,得到发酵液;


本实施例中的复合氨基酸按质量份包含精氨酸1份、赖氨酸1份、组氨酸1份、苏氨酸1
份、天冬氨酸1份和丙氨酸1份。


(3)、将发酵液进行残渣过滤,收集滤液,将滤液倒入容器内密封,并放置到蒸汽灭
菌柜中进行灭菌,温度为121℃,时间为30min,冷却后得到液体培养基;


(4)、将虫草菌?#32440;?#31181;至液体培养基中,每次单体接种量为对应培养基重量的5%,接种
后进行摇床培养,培养温度为15-20℃,培养时间为12d,后4天进行光照培养,得到含有虫草
菌丝的液体菌种;


(5)、将液体菌种通过注射器向无菌干燥的大麦虫内进行缓慢注射,注射点3-5个,注射
?#20102;?#20027;表面均潮湿后停止注射;


(6)、将培养宿主装置培养瓶中,进行无光黑暗培养30d,培养温度为15-20℃;再进行光
照培养35d,培养温度为26-30℃,即得到人工虫草。


对比例


(1)、按质量份将淀粉45份、葡萄糖15份、维生素10份、复合氨基酸6份、磷酸二氢钾1份、
硫酸镁1份、酵母10份和水900份进行混合,并发酵3d,得到发酵液;


本实施例中的复合氨基酸按质量份包含精氨酸1份、赖氨酸1份、组氨酸1份、苏氨酸1
份、天冬氨酸1份和丙氨酸1份。


(2)、将发酵液进行残渣过滤,收集滤液,将滤液倒入容器内密封,并放置到蒸汽灭
菌柜中进行灭菌,温度为121℃,时间为30min,冷却后得到液体培养基;


(3)、将虫草菌?#32440;?#31181;至液体培养基中,每次单体接种量为对应培养基重量的5%,接种
后进行摇床培养,培养温度为15-20℃,培养时间为12d,后4天进行光照培养,得到含有虫草
菌丝的液体菌种;


(4)、将液体菌种通过注射器向无菌干燥的大麦虫内进行缓慢注射,注射点3-5个,注射
?#20102;?#20027;表面均潮湿后停止注射;


(5)、将培养宿主装置培养瓶中,进行无光黑暗培养30d,培养温度为15-20℃;再进行光
照培养35d,培养温度为26-30℃,即得到人工虫草。


评价:


将实施例1、实施例2、实施例3、对比例和野生虫草进行腺苷、虫草素和多糖的含量检
测,检测结果见表1。


腺苷的含量测定依据《中国药典》的冬虫夏草质量标准进行测定,具体方法为:以
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(C18),以磷酸盐缓冲液(pH6.5,取0.01mol/L磷酸二氢钠
68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠315mL混合)-甲醇(85:15)为流动相;检测波长为260nm;精
密称取腺苷对照品,并加入90%甲醇制成每1mL含20μg的溶液,即得到对照品溶液;分别取实
施例1、实施例2、实施例3、对比例和野生虫草各0.5g,精密称定,?#38209;?#22622;锥形瓶中,精密加入
90%甲醇10mL,密塞,摇匀,称定重量,加热回流30min,放冷,再补重,摇匀,过滤,取续滤液,
即得各样品溶液;分别吸取对照品溶液和样品溶液各10μl,注入?#21512;?#33394;谱仪,通过浓度比等
于峰面积比,计算出各样品腺苷含量。


虫草素含量检测,C18色谱柱,以乙腈-水(7∶ 93) 为流动相,流速1.0mL /min,检
测波长260 nm。精密称定各样品,置250 mL 量瓶中;加50%乙醇20 mL。超声( 功率100 W,频
率40 kHz)振荡提取20 min,放冷,加50% 乙醇?#37327;潭取?#32463;0.5μm 微孔滤膜滤过,即为样品溶
液。用外标法计算样品中虫草素的含量。


多糖含量的检测,测定方法:精确吸取各样品处理液1.0mL,置10 mL 比色管中,加
蒸馏水至2.0mL。空白对照管则用蒸馏水。样品管和空白管中加6% 苯酚溶液1.0mL,摇匀,然
后迅速加入浓硫酸5.0mL,摇匀,在室温下放置5 min,置沸水浴中加热15 min,取出后迅速
冷却至室温,于490 nm 处测吸光?#21462;?br>





通过表1中的数据可知,本申请人工培育的虫草中的腺苷、虫草素和多糖均要明显
高于对比例,虽然其有效活性成分没有野生虫草高,但是已经比较接近野生虫草含量,具有
一定的取代能力,所以本发明具有一定的创造性。


以上对本发明的实施例进行了示例?#36816;?#26126;,但所述内容仅为本发明的较佳实施
例,不能被认为用于限定本发明的实施?#27573;А?#20961;依据本发明申请?#27573;?#30340;均等变化与改进等,
均应归属于本发明的专利涵盖?#27573;?#20043;内。


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