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一种舒更葡糖的分离纯化方法.pdf

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一种 葡糖 分离 纯化 方法
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摘要
申请专利号:

CN201910042937

申请日:

20190118

公开号:

CN109517094A

公开日:

20190326

当前法律状态:

实质审查的生效

有效性:

审中

法?#19978;?#24773;: 实质审查的生效
IPC分类号: C08B37/16 主分类号: C08B37/16
申请人: 苏州纳微科技股份有限公司
发明人: 江必旺;王希;李易
地址: 215000 江苏省苏州市工业园区百川街2号
优先权:
专利代理机构: 32232 代理人: 何蔚
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法律状态
申请(专利)号:

CN201910042937

授权公告号:

法律状态公告日:

20190419

法律状态类型:

实质审查的生效

摘要

本发明提供了一种高效分离纯化舒更葡糖的方法,包括以下?#34903;瑁?#23558;舒更葡糖粗提取物进行溶解、过滤;将上述过滤后的溶液上样到装有弱阴离子交换树脂中进行层析;采用盐溶液作为流动相对目标产物进行洗脱;分段收集目的峰值的溶液,对符合要求的组份液进行汇总。本发明用于舒更葡糖的深度精纯,仅需一步层析纯化?#32431;?#28385;足舒更葡糖纯度大于99.0%,单?#26377;?#20110;0.1%的要求,纯化收率高而稳定,本发明采用醋酸钠水溶液和氯化钠水溶液作为流动相,不采用有机溶剂,所用流动相安全、无污染?#39029;?#26412;较低。同时本发明分离方法简单方便,可用于规模化生产,大大?#26723;?#29983;产成本。

权利要求书

1.一种舒更葡糖的分离纯化方法,其特征在于,包括以下?#34903;瑁?#23558;舒更葡糖粗提取物进行溶解、过滤;将上述过滤后的舒更葡糖溶液上样到弱阴离子交换树脂中进行层析;采用盐溶液作为流动相?#36816;?#36848;舒更葡糖溶液进行梯度洗脱;分段收集目的峰值的舒更葡糖溶液,对符合要求的组份液进行汇总,得到纯化的舒更葡糖。 2.如权利要求1所述的舒更葡糖的分离纯化方法,其特征在于,所述流动相为:A相:pH=5.5的20mM醋酸钠;B相:pH=5.5的20mM醋酸钠+1MNaCl。 3.如权利要求1所述的舒更葡糖的分离纯化方法,其特征在于,所述弱阴离子交换树脂的产品型号是UniDEAE。 4.如权利要求1所述的舒更葡糖的分离纯化方法,其特征在于,上样前,?#36816;?#36848;弱阴离子交换树脂层析柱进行平衡,先用40%-50%B相进行除杂,后用100%A相进行平衡。 5.如权利要求1所述的舒更葡糖的分离纯化方法,其特征在于,所述梯度洗脱过程为,先用A相冲洗,再用A、B相对主峰进行梯度洗?#36873;?6.如权利要求5所述的舒更葡糖的分离纯化方法,其特征在于,所述B相溶液中,洗脱梯度浓度?#27573;?#20026;0%-32%。 7.如权利要求5所述的舒更葡糖的分离纯化方法,其特征在于,所述梯度洗脱过程为,第一阶段,用A相冲洗;第二阶段,用A、B相梯度洗脱主峰,其中,B相的浓度由0%提高至4%;第三阶段,B相的浓度由4%提高至8%;第四阶段,B相的浓度由8%提高至20%;第五阶段,B相的浓度由20%提高至32%。 8.如权利要求1~7任一所述的舒更葡糖的分离纯化方法,其特征在于,所述舒更葡糖粗提取物的纯度为90%-95%。 9.如权利要求1~7任一所述的舒更葡糖的分离纯化方法,其特征在于,所述纯化的舒更葡糖的纯度在99.0%以上。 10.如权利要求1~7任一所述的舒更葡糖的分离纯化方法,其特征在于,所述纯化的舒更葡糖的收率在59.0%以上。

说明书


一种舒更葡糖的分离纯化方法
技术领域


本发明涉及药物纯化领域,特别是一种高效分离纯化舒更葡糖的方法。


背景技术


舒更葡糖(Sugammadex)属于甾体类肌松药的选择性拮抗剂,用于快速逆转成年患
者手术中麻醉剂罗库溴铵、维库溴铵引起的神经肌肉阻断。舒更葡糖是人工合成改良γ-环
糊精,由亲脂核心和亲水外端组成。舒更葡糖经由静脉注射给药,可以显著?#32435;?#25163;术后肌松
的恢复,短时间内迅速逆转甾体类肌松药的神经肌肉阻滞作用对于提高全身麻醉的安全性
具有积极的意义。


结构式如下:






目前国内外专利、文献等对舒更葡糖的报道多为合成方法和临床方面的专利,分
离纯化方法鲜有报道。CN201810153493.0提供了一种舒更葡糖的分离纯化方法,其中描述
了采用C18反相柱色谱分离纯化,流动相为超纯水和乙腈,该方法使用溶剂为有机试剂,有
一定危害。因此有必要对舒更葡糖的分离、纯化和制备做更进一步的研究。


发明内容


本发明的目的在于提供一种高效分离纯化舒更葡糖的方法,仅需一步层析纯化即
可满足舒更葡糖纯度大于99.0%,单?#26377;?#20110;0.1%的要求,纯化收率高而稳定,同时本发明
使用纯水相,无有机溶剂,成?#38236;停?#29615;保绿色,适合工业化分离纯化。


为达到上述目的,本发明的技术方案如下:一种舒更葡糖的分离纯化方法,包括以
下?#34903;瑁?#23558;舒更葡糖粗提取物进行溶解、过滤;将上述过滤后的舒更葡糖溶液上样到弱阴离
子交换树脂层析柱中进行层析;采用盐溶液作为流动相?#36816;?#36848;舒更葡糖溶液进行洗脱;分
段收集目的峰值的舒更葡糖溶液,对符合要求的组份液进行汇总,得到纯化的舒更葡糖。


优选的,所述流动相为:A相:pH=5.5的20mM醋酸钠;B相:pH=5.5的20mM醋酸钠+
1MNaCl。


优选的,所述弱阴离子交换树脂的微球型号是UniDEAE。


优选的,上样前,?#36816;?#36848;弱阴离子交换树脂层析柱进行平衡,先用40%-50%B相进
行除杂,后用100%A相进行平衡。


优选的,所述梯度洗脱过程为,先用A相冲洗,再用A、B相对主峰进行梯度洗?#36873;?br>

优选的,所述B相溶液中,洗脱梯度浓度?#27573;?#20026;0%-32%。


优选的,所述梯度洗脱过程为,第一阶段,用A相冲洗;第二阶段,用A、B相梯度洗脱
主峰,其中,B相的浓度由0%提高至4%;第三阶段,B相的浓度由4%提高至8%;第四阶段,B
相的浓度由8%提高至20%;第五阶段,B相的浓度由20%提高至32%。


优选的,所述舒更葡糖粗提取物的纯度为90%-95%。


优选的,所述纯化的舒更葡糖的纯度在99.0%以上。


优选的,所述纯化的舒更葡糖的收率在59.0%以上。


UniDEAE是一种弱阴离子交换层析介质,其基质为单分散的聚丙烯酸酯,基?#26102;?#38754;
还键合了叔胺基功能基团。该聚丙烯酸酯基?#36866;?#27700;性很弱,可以在纯水相中分离纯化舒更
葡糖,同时它具有高分子聚合物基质的特点,具有很好的?#22270;?#24615;,可以在比较高的碱性条件
下冲洗活化层析介质,具有更优异的耐冲击性、?#22270;?#24615;及耐老化性,?#23545;?#20248;于传统硅胶基质
的反相色谱填?#24076;?#22240;?#21496;?#26377;很长的使用寿命。


同时UniDEAE层析介质具有严格控制的粒径大小和孔径结构(粒径为36μm,孔径

如图1,该层析介质的微观扫描电镜图)。舒更葡糖是人工合成改良γ-环糊精,由亲
脂核心和亲水外端组成,UniDEAE的功能基团和基?#24066;?#36136;可以很好地结合和分离舒更葡糖,
用作舒更葡糖分离纯化的层析介?#36866;本?#26377;很好的针对性。


本发明采用醋酸钠水溶液和氯化钠水溶液作为流动相,用20-22个柱体积就可完
成舒更葡糖主峰的洗脱,不采用有机溶剂,因此本发明方法所用流动相安全、无污染?#39029;?#26412;
较低。


本发明采用UniDEAE-30S作为固定相,通过梯度洗脱可使舒更葡糖纯度高于
99.0%,单?#26377;?#20110;0.1%,收率可达59.0%,适用于舒更葡糖的深度提纯。


因此,本发明方法分离纯化舒更葡糖,不仅纯度高、收率高且稳定,而且操作简单
方便,所用固定相可重复利用,所用流动相环保无危害,大大?#26723;?#25104;本。


附图说明


图1为实施例1使用的UniDEAE微球的的扫描电镜照片。


图2为实施例1提纯前的舒更葡糖粗提取物的高效?#21512;?#33394;谱分析。


图3为实施例1纯化后的舒更葡糖的高效?#21512;?#33394;谱分析。


具体实施方式


下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述,但本发明并不限于这
些实施例。


一种舒更葡糖的分离纯化方法,包括以下?#34903;瑁?#23558;舒更葡糖粗提取物进行溶解、过
滤;将上述过滤后的舒更葡糖溶液上样到弱阴离子交换树脂层析柱中进行层析;采用盐溶
液作为流动相?#36816;?#36848;舒更葡糖溶液进行洗脱;分段收集目的峰值的舒更葡糖溶液,对符合
要求的组份液进行汇总,得到纯化的舒更葡糖。


优选的,所述流动相为:A相:pH=5.5的20mM醋酸钠;B相:pH=5.5的20mM醋酸钠+
1MNaCl。


优选的,所述弱阴离子交换树脂的微球型号是UniDEAE。


优选的,上样前,?#36816;?#36848;弱阴离子交换树脂层析柱进行平衡,先用40%-50%B相进
行除杂,后用100%A相进行平衡。


优选的,所述梯度洗脱过程为,先用A相冲洗,再用A、B相对主峰进行梯度洗?#36873;?br>

优选的,所述B相溶液中,洗脱梯度浓度?#27573;?#20026;0%-32%。


优选的,所述梯度洗脱过程为,第一阶段,用A相冲洗;第二阶段,用A、B相梯度洗脱
主峰,其中,B相的浓度由0%提高至4%;第三阶段,B相的浓度由4%提高至8%;第四阶段,B
相的浓度由8%提高至20%;第五阶段,B相的浓度由20%提高至32%。


优选的,所述弱阴离子交换树脂的微球型号是UniDEAE-30S。


优选的,所述舒更葡糖粗提取物的纯度为90%-95%。


优选的,所述纯化的舒更葡糖的纯度在99.0%以上。


优选的,所述纯化的舒更葡糖的收率在59.0%以上。


实施例1


取纯度为93.11%的舒更葡糖粗提取物,加水溶解,溶液中舒更葡糖含量为50mg/
mL。待溶液澄清后,用孔径为0.45μm滤膜过滤,收集滤液待用。采用4.6×250mm的色谱柱,
UniDEAE-30S微球(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填?#24076;?#35013;柱体积为4.2ml。以
20mM醋酸钠溶液(A相)和20mM醋酸钠+1MNaCl(B相)作为流动相进行梯度洗?#36873;?#23545;层析柱进
行柱前预处理,先用50%B相进行除杂,后用100%A相进行平衡。流速控制在0.4ml/min。梯
度洗脱过程为,先用100%A相冲洗15?#31181;櫻?#21518;在15-20?#31181;?#20869;洗?#38597;?#24230;梯度由0%B提高至
4%B,20-40?#31181;?#20869;浓度梯度由4%B提高至8%B,40-120?#31181;?#20869;浓度梯度由8%B提高至20%
B,120-200?#31181;?#20869;浓度梯度由20%B提高至32%B。分段收集目的峰值的溶液,对符合要求的
组份液进行汇总,经高效?#21512;?#33394;谱分析,洗脱液中舒更葡糖的纯度99.658%,单?#26377;?#20110;
0.1%,收率59.5%。


图2是提纯前的舒更葡糖粗提取物的高效?#21512;?#33394;谱分析,可见有一定的杂?#30465;?#22270;3
是提纯后的舒更葡糖高效?#21512;?#33394;谱分析,可见杂质非常少,杂峰非常小。


实施例2


取纯度为92.55%的舒更葡糖粗提取物,加水溶解,溶液中舒更葡糖含量为50mg/
mL。待溶液澄清后,用孔径为0.45μm滤膜过滤,收集滤液待用。采用4.6×250mm的色谱柱,
UniQ-30S微球作为层析柱填?#24076;?#35013;柱体积为4.2ml。以20mM醋酸钠溶液(A相)和20mM醋酸钠+
1MNaCl(B相)作为流动相进行梯度洗脱,对层析柱进行柱前预处理,先用50%B相进行除杂,
后用100%A相进行平衡。流速控制在0.4ml/min。梯度洗脱过程为,先用100%A相冲洗15分
钟,后在15-20?#31181;?#20869;浓度梯度由0%B提高至4%B,20-40?#31181;?#20869;浓度梯度由4%B提高至8%
B,40-120?#31181;?#20869;浓度梯度由8%B提高至20%B,120-200?#31181;?#20869;浓度梯度由20%B提高至
32%B。分段收集目的峰值的溶液,对符合要求的组份液进行汇总,经高效?#21512;?#33394;谱分析,洗
脱液中舒更葡糖的纯度99.2%,单?#26377;?#20110;0.1%,收率23.3%。


实施例3


取纯度为92.55%的舒更葡糖粗提取物,加水溶解,溶液中舒更葡糖含量为50mg/
mL。待溶液澄清后,用孔径为0.45μm滤膜过滤,收集滤液待用。采用4.6×250mm的色谱柱,
UniDEAE-30S微球作为层析柱填?#24076;?#35013;柱体积为4.2ml。以20mM醋酸钠溶液(A相)和20mM醋酸
钠+1MNaCl(B相)作为流动相进行梯度洗脱,对层析柱进行柱前预处理,先用50%B相进行除
杂,后用100%A相进行平衡。流速控制在0.4ml/min。梯度洗脱过程为,10%B提高至40%B洗
脱20个柱体积。分段收集目的峰值的溶液,对符合要求的组份液进行汇总,经高效?#21512;?#33394;谱
分析,洗脱液中舒更葡糖的纯度98.310%,有部分单杂含量超出0.1%,未有合格部分。


本发明用于舒更葡糖的深度精纯,仅需一步层析纯化?#32431;?#28385;足舒更葡糖单?#26377;?#20110;
0.1%的要求,纯化收率高而稳定。本发明采用醋酸钠水溶液和氯化钠水溶液作为流动相,
不采用有机溶剂,所用流动相安全、无污染?#39029;?#26412;较低。同时本发明分离方法简单方便,可
用于规模化生产,大大?#26723;?#29983;产成本。


以上所述的仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本领域的普通技术人员
来说,在不脱离本发明创造构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明
的保护?#27573;А?br>

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