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一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法.pdf

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一种 小鼠 胚胎 颌下腺 获取 方法
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摘要
申请专利号:

CN201910039018

申请日:

20190116

公开号:

CN109628381A

公开日:

20190416

当前法律状态:

公开

有效性:

审中

法?#19978;?#24773;: 公开
IPC分类号: C12N5/073;C12N5/071 主分类号: C12N5/073;C12N5/071
申请人: 四川大学
发明人: 刘志凯;李春洁;吴樱仪;曹钰彬
地址: 610041 四川省成都市武侯区一环路南一段24号
优先权:
专利代理机构: 51214 代理人: 邓亚君
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法律状态
申请(专利)号:

CN201910039018

授权公告号:

法律状态公告日:

20190416

法律状态类型:

公开

摘要

本发明公开了一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,涉及生物医学领域。该方法包括:游离子宫:将怀孕小鼠处死后,完整游离出包含胚胎的子宫;游离胚胎:打开子宫壁,完整游离出胚胎;获取胚胎下颌组织:在解剖显微镜下,从胚胎中获取下颌组织;获取胚胎颌下腺:将下颌组织置于解剖显微镜下,视野清楚放大后固定,分离最表层组织后,夹断颌下腺与舌体及导管的连?#27185;?#21363;可获取完整的胚胎颌下腺。该方法改进了小鼠胚胎颌下腺的获取操作,与传统方法相比,减少了操作步骤,?#26723;?#20102;操作难度,并且更大程度上保证了取出的颌下腺组织的完整性,从而提供了一种更好的颌下腺体外培养的模型,为颌下腺相关疾病的研究提供一个可靠的平台。

权利要求书

1.一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,其特征在于,其包括如下步骤: (1)游离子宫:将怀孕小鼠处死后,完整游离出包含胚胎的子宫; (2)游离胚胎:打开子宫壁,完整游离出胚胎; (3)获取胚胎下颌组织:在解剖显微镜下,从胚胎中获取下颌组织; (4)获取胚胎颌下腺:将下颌组织置于解剖显微镜下,视野清楚放大后固定,分离最表层组织后,夹断颌下腺与舌体及导管的连?#27185;?#21363;可获取完整的胚胎颌下腺。 2.根据权利要求1所述的小鼠胚胎颌下腺的获取方法,其特征在于,步骤(1)中,小鼠的孕龄为12-14天。 3.根据权利要求2所述的小鼠胚胎颌下腺的获取方法,其特征在于,所述小鼠选?#36816;?#36848;小鼠品种选自BALB/c小鼠、C57BL小鼠、C3H小鼠、C3H/He小鼠、KM小鼠、ICR小鼠、NIH小鼠、CFW小鼠、LACA小鼠中的?#25105;?#19968;种。 4.根据权利要求1所述的小鼠胚胎颌下腺的获取方法,其特征在于,步骤(2)中,打开子宫后,将胚胎夹持取出胚胎;夹持过程中,夹持部位远离颌下腺。 5.根据权利要求1所述的小鼠胚胎颌下腺的获取方法,其特征在于,步骤(3)中,在显微镜光源上放置一层白色覆盖物。 6.根据权利要求5所述的小鼠胚胎颌下腺的获取方法,其特征在于,在显微镜下,视野清楚后,固定胚胎,自颈部与颏部之间切下胚胎头部;然后,于口裂处舌头上方自前向后由平行于下颌长轴的方向切下下颌组织。 7.根据权利要求6所述的小鼠胚胎颌下腺的获取方法,其特征在于,所述下颌组织包括麦克尔软骨、舌、颌下腺、舌下腺、脊髓颈段及软组织。 8.根据权利要求1所述的小鼠胚胎颌下腺的获取方法,其特征在于,步骤(4)中,将胚胎下颌组织头部断面朝下,颈部断面朝上,舌尖指向 12 点钟方向的方式放置在解剖显微镜下;固定脊髓颈段部分以固定下颌组织。 9.根据权利要求8所述的小鼠胚胎颌下腺的获取方法,其特征在于,分离表层组织后,将两侧下颌软骨分别向左右适当牵拉,分离颌下腺外侧多余组织;然后沿12点钟将直镊沿前上向后下方向插入颌下腺后部,夹断其与舌体及导管连接。

说明书


一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法
技术领域


本发明涉及生物医学领域,具体而言涉及一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法。


背景技术


颌下腺即下颌部的唾液腺,左右各一个,属于唾液腺的一个组成部分,主要的功能
就是分泌唾液。颌下腺位于下巴骨(下颌骨)的下方,接近下巴骨弯曲角附近,所以?#27493;?#19979;颌
下腺(下颌骨下方的唾液腺)。颌下腺作为唾液腺重要的组成部分,通过提供唾液来发?#28216;?br>持口腔内酸碱?#21462;?#26432;灭有害细菌等作用,来维持口腔健康。目前,因唾液腺功能丧失或手术
切除唾液腺的患者生活质量会明显?#26723;汀?#22240;?#25628;?#31350;小鼠胚胎过程中颌下腺的?#31181;?#24418;态发生
及相关影响因素,对更好地构建体外颌下腺模型供临床实验研究、设计构造人工颌下腺等
均有重要意义。


小鼠胚胎颌下腺则是相关研究中重要的体外培养模型。但如何获取小鼠胚胎颌下
腺一直是一个难点。目前多采用双侧旋转分离下颌软骨的方法,但该方法在显微镜镜下操
作时步骤较多且复?#27185;?#21516;时颌下腺腺体并不能完全附着于舌体,需要?#32454;?#30340;技巧及足够的
熟练度后才有一定的成功率,且取出的颌下腺组织多不完整。


发明内容


本发明的发明目的在于:针对上述存在的问题,提供一种小鼠胚胎颌下腺的获取
方法,该方法步骤简便,容易操作,取出的颌下腺组织的完整性高,从而提供了一种更好的
颌下腺体外培养的模型。


本发明采用的技术方案如下:


一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,其包括如下步骤:


(1)游离子宫:将怀孕小鼠处死后,完整游离出包含胚胎的子宫;


(2)游离胚胎:打开子宫壁,完整游离出胚胎;


(3)获取胚胎下颌组织:在解剖显微镜下,从胚胎中获取下颌组织;


(4)获取胚胎颌下腺:将下颌组织置于解剖显微镜下,视野清楚放大后固定,分离最表
层组织后,夹断颌下腺与舌体及导管的连?#27185;?#21363;可获取完整的胚胎颌下腺。


本发明的一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,步骤(1)中,小鼠的孕龄为12-14天。


本发明的一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,所述小鼠选?#36816;?#36848;小鼠品种选自
BALB/c小鼠、C57BL小鼠、C3H小鼠、C3H/He小鼠、KM小鼠、ICR小鼠、NIH小鼠、CFW小鼠、LACA小
鼠中的?#25105;?#19968;种。


本发明的一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,步骤(2)中,打开子宫后,将胚胎夹持
取出胚胎;夹持过程中,夹持部位远离颌下腺。


本发明的一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,步骤(3)中,在显微镜光源上放置一层
白色覆盖物。


本发明的一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,在显微镜下,视野清楚后,固定胚胎,
自颈部与颏部之间切下胚胎头部;然后,于口裂处舌头上方自前向后由平行于下颌长轴的
方向切下下颌组织。


本发明的一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,所述下颌组织包括麦克尔软骨、舌、颌
下腺、舌下腺、脊髓颈段及软组织。


本发明的一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,步骤(4)中,将胚胎下颌组织头部断面
朝下,颈部断面朝上,舌尖指向 12 点钟方向的方式放置在解剖显微镜下;固定脊髓颈段部
分以固定下颌组织。


本发明的一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,分离表层组织后,将两侧下颌软骨分
别向左右适当牵拉,分离颌下腺外侧多余组织;然后沿12点钟将直镊沿前上向后下方向插
入颌下腺后部,夹断其与舌体及导管连接。


综上所述,由于采用了上述技术方案,本发明的有益效果?#29301;?br>

本发明提供一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,该方法改进了小鼠胚胎颌下腺的获取操
作,与传统方法相比,减少了操作步骤,?#26723;?#20102;操作难度,并且更大程度上保证了取出的颌
下腺组织的完整性,从而提供了一种更好的颌下腺体外培养的模型,为颌下腺相关疾病的
研究提供一个可靠的平台。


附图说明


本发明将通过例子并参照附图的方式说明,其中:


图1是实施例5中获取的颌下腺的图片。


具体实施方式


本说明书中公开的所有特征,或公开的所有方法或过程中的步骤,除了互相排斥
的特征和/或步骤以外,均可以以任何方式组合。


本说明书(包括任何附加权利要求、摘要)中公开的任一特征,除非特别叙述,均可
被其他等效或具有类似目的的替代特征加以替换。即,除非特别叙述,每个特征只是一系列
等效或类似特征中的一个例子而?#36873;?br>

实施例1


本实施例提供一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,该方法步骤简便,容易操作取出的颌
下腺组织的完整性高。具体步骤如下:


步骤一:将怀孕小鼠处死后,完整游离出包含胚胎的子宫。


步骤二:打开子宫壁,完整游离出胚胎。


步骤三:在显微镜下,从胚胎中获取下颌组织。


步骤四:将下颌组织置于显微镜下,视野清楚放大后固定,分离最表层组织后,夹
断颌下腺与舌体及导管的连?#27185;?#21363;可获取完整的胚胎颌下腺。


实施例2


本实施例提供一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,该方法步骤简便,容易操作取出的颌
下腺组织的完整性高。具体步骤如下:


步骤一:取孕龄12天的C57BL小鼠,以颈?#20302;?#20301;法处死,用75%酒精浸泡消毒小鼠胸腹
部,在小鼠?#20849;?#20013;线由耻骨联合直线剪开皮肤、肌肉及腹膜暴露?#39592;恢两?#31361;下方,牵开?#20849;?br>皮肤及肌肉显露子宫,以小弯钳抬起子宫,剪?#37117;?#24320;并分离子宫?#30340;?#28216;离子宫,在此过程中
防止?#36153;?#23376;宫及胚胎,将游离出的包含胚胎的子宫置于盛有 25mL 储存用培养基的 100mm
培养皿中,4 ℃暂存。此处所述储存用培养基成分为:DMEM/F12 液体培养基,加入青霉素溶
液和链霉素溶液,最终浓度分别为100U/ml和100μg/ml,存储于4 ℃冰箱中(下同)。


步骤二:打开子宫壁,完整游离出胚胎。


步骤三:在显微镜下,从胚胎中获取下颌组织。


步骤四:将下颌组织置于显微镜下,视野清楚放大后固定,分离最表层组织后,夹
断颌下腺与舌体及导管的连?#27185;?#21363;可获取完整的胚胎颌下腺。


实施例3


本实施例提供一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,该方法步骤简便,容易操作取出的颌
下腺组织的完整性高。具体步骤如下:


步骤一:取孕龄13天的C3H小鼠,以颈?#20302;?#20301;法处死,用75%酒精浸泡消毒小鼠胸?#20849;浚?br>在小鼠?#20849;?#20013;线由耻骨联合直线剪开皮肤、肌肉及腹膜暴露?#39592;恢两?#31361;下方,牵开?#20849;?#30382;
肤及肌肉显露子宫,以小弯钳抬起子宫,剪?#37117;?#24320;并分离子宫?#30340;?#28216;离子宫,在此过程中防
止?#36153;?#23376;宫及胚胎,将游离出的包含胚胎的子宫置于盛有 25mL 储存用培养基的 100mm
培养皿中,4 ℃暂存。


步骤二:以显微直解剖镊打开子宫壁,并小心将胚胎夹持,从子宫中分离,此过程
中为了防止?#36153;?#25439;伤颌下腺,夹持过程中,夹持部应远离下颌下腺;将游离出的胚胎置于盛
有 25mL 储存用培养基的100mm培养皿中,4 ℃暂存。


步骤三:在显微镜下,从胚胎中获取下颌组织。


步骤四:将下颌组织置于显微镜下,视野清楚放大后固定,分离最表层组织后,夹
断颌下腺与舌体及导管的连?#27185;?#21363;可获取完整的胚胎颌下腺。


实施例4


本实施例提供一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,该方法步骤简便,容易操作取出的颌
下腺组织的完整性高。具体步骤如下:


步骤一:取孕龄14天的CFW小鼠,以颈?#20302;?#20301;法处死,用75%酒精浸泡消毒小鼠胸?#20849;浚?br>在小鼠?#20849;?#20013;线由耻骨联合直线剪开皮肤、肌肉及腹膜暴露?#39592;恢两?#31361;下方,牵开?#20849;?#30382;
肤及肌肉显露子宫,以小弯钳抬起子宫,剪?#37117;?#24320;并分离子宫?#30340;?#28216;离子宫,在此过程中防
止?#36153;?#23376;宫及胚胎,将游离出的包含胚胎的子宫置于盛有 25mL 储存用培养基的 100mm
培养皿中,4 ℃暂存。


步骤二:以显微直解剖镊打开子宫壁,并小心将胚胎夹持,从子宫中分离,此过程
中为了防止?#36153;?#25439;伤颌下腺,夹持过程中,夹持部应远离下颌下腺;将游离出的胚胎置于盛
有 25mL 储存用培养基的100mm培养皿中,4 ℃暂存。


步骤三:在解剖显微镜光源处覆盖一层纸巾可增加其漫反射光,使组织阴影更加
立体便于观察。将胚胎置于解剖显微镜下,调节至适当放大倍数,并调节至视野清楚;侧向
放置胚胎,以直镊固定胚胎体部,自颈部与颏部之间切下胚胎头部,此时可见下颌部分两处
明显出血点,即为双侧颈动脉,颌下腺即位于其内侧。再于口裂处舌头上方,自前向后由平
行于下颌长轴的方向切下下颌组织,主要包含麦克尔软骨、舌、下颌下腺、舌下腺、脊髓颈段
及少量其他软组织;将切下的下颌组织置于盛有3mL储存用培养基的35mm培养皿中;4 ℃暂
存暂存。


步骤四:将下颌组织置于显微镜下,视野清楚放大后固定,分离最表层组织后,夹
断颌下腺与舌体及导管的连?#27185;?#21363;可获取完整的胚胎颌下腺。


实施例5


本实施例提供一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法,该方法步骤简便,容易操作取出的颌
下腺组织的完整性高。具体步骤如下:


步骤一:将所有手术及培养器械消毒灭菌,手术人员穿着防护服,进入无菌操作环境。


步骤二:取孕龄13天的ICR小鼠,以颈?#20302;?#20301;法处死,用75%酒精浸泡消毒小鼠胸腹
部,在小鼠?#20849;?#20013;线由耻骨联合直线剪开皮肤、肌肉及腹膜暴露?#39592;恢两?#31361;下方,牵开?#20849;?br>皮肤及肌肉显露子宫,以小弯钳抬起子宫,剪?#37117;?#24320;并分离子宫?#30340;?#28216;离子宫,在此过程中
防止?#36153;?#23376;宫及胚胎,将游离出的包含胚胎的子宫置于盛有 25mL 储存用培养基的 100mm
培养皿中,4 ℃暂存。


步骤三:以显微直解剖镊打开子宫壁,并小心将胚胎夹持,从子宫中分离,此过程
中为了防止?#36153;?#25439;伤颌下腺,夹持过程中,夹持部应远离下颌下腺;将游离出的胚胎置于盛
有 25mL 储存用培养基的100mm培养皿中,4 ℃暂存。


步骤四:在解剖显微镜光源处覆盖一层纸巾可增加其漫反射光,使组织阴影更加
立体便于观察。将胚胎置于解剖显微镜下,调节至适当放大倍数,并调节至视野清楚;侧向
放置胚胎,以直镊固定胚胎体部,自颈部与颏部之间切下胚胎头部,此时可见下颌部分两处
明显出血点,即为双侧颈动脉,颌下腺即位于其内侧。再于口裂处舌头上方,自前向后由平
行于下颌长轴的方向切下下颌组织,主要包含麦克尔软骨、舌、下颌下腺、舌下腺、脊髓颈段
及少量其他软组织;将切下的下颌组织置于盛有3mL储存用培养基的35mm培养皿中;4 ℃暂
存暂存。


步骤五:将胚胎下颌组织以头部断面朝下,颈部断面朝上,舌尖指向 12 点钟方向
的方式放置在解剖显微镜下,调节至适当放大倍数,并调节至视野清楚;用用直镊固定脊髓
颈段部分以固定整个组织,用另一个直镊,沿中线分离颈部断面下颌部分最表层组织,分离
后即可一定程度见颌下腺腺体,位于舌体两侧。用直镊将两侧下颌软骨分别向左右适当牵
拉,分离颌下腺外侧多余组织;沿12点钟将直镊沿前上向后下方向插入颌下腺后部,夹断其
与舌体及导管连?#27185;?#21363;可较为完整的分离胚胎小鼠的颌下腺组织。


用本实施例提供的方法获取的小鼠颌下腺组织如图1所示。


需要说明的?#29301;?#36890;过本发明提供的方法获得的颌下腺组织包含下颌下腺及舌下
腺,二者通常难以分开。但?#29301;?#22312;玻璃培养皿中培养?#20445;?#22312;倒置显微镜下可以看到舌下腺稍
小,上皮芽较少,受?#26800;?3天的胚胎中常只有一个上皮芽出现,与颌下腺紧密相邻,此时的
颌下腺一般已有 3-5 个上皮芽。


本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的
新特征或任何新的组合,以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。


关于本文
本文标题:一种小鼠胚胎颌下腺的获取方法.pdf
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