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一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组、试剂盒及应用.pdf

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一种 用于 非洲 猪瘟 病毒 LAMP 检测 引物 试剂盒 应用
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摘要
申请专利号:

CN201910036166

申请日:

20190115

公开号:

CN109628644A

公开日:

20190416

当前法律状态:

公开

有效性:

审中

法律详情: 公开
IPC分类号: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 主分类号: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
申请人: 许昌佰柯蛋白与基因工程研究院有限公司
发明人: 王学庆;李鹏云;王楠
地址: 461000 河南省许昌市东城区许昌学院工程技术中心三楼325房间
优先权:
专利代理机构: 11569 代理人: 代芳
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法律状态
申请(专利)号:

CN201910036166

授权公告号:

法律状态公告日:

20190416

法律状态类型:

公开

摘要

本发明提供了一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组、试剂盒及应用,属于病毒的分子生物学检测技术领域,所述试剂盒操作简单,对设备要求低,在检测时,只需将检测样品和检测反应液放入58℃恒?#28388;?#28020;锅中孵育50min后即可完成扩增。并且,本发明的试剂盒具有灵敏度高和特异性强的优点。此外,本发明通过肉眼观察反应液颜色变化判读结果,若反应液呈黄色,检测为非洲猪瘟病毒阳性;若反应液?#39135;?#32418;色,检测结果为非洲猪瘟病毒阴性。本发明的方法直观方便,且可有效避免反应后开盖造成的气溶胶污染。

权利要求书

1.一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组,所述引物组包括外引物F3、B3和内引物FIP、BIP;所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述B3的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示;所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;所述BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。 2.一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述引物组。 3.根据权利要求2所示的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括10×buffer、Bst DNA聚合酶、稳定剂、MnCl2、4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚和DEPC水。 4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述稳定剂为甜菜碱溶液;所述甜菜碱溶液中甜菜碱的浓度为4~6M。 5.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品。 6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述阳性对照品为非洲猪瘟病毒基因组DNA;所述阴性对照品为双蒸水。 7.权利要求1所述的引物组或权利要求2~6?#25105;?#19968;项所述的试剂盒在非诊断目的的非洲猪瘟病毒LAMP检测中的应用,其特征在于,所述应用包括以下步骤: 1)提取待测非洲猪瘟病毒的基因组DNA; 2)?#28304;?#27979;非洲猪瘟病毒DNA的基因组DNA为模板,利用权利要求1所述引物组中的外引物F3、B3和内引物FIP、BIP,进行LAMP扩增反应,获得LAMP扩增产物; 3)观察反应液颜色,若反应液呈黄色,检测为非洲猪瘟病毒阳性;若反应液?#39135;?#32418;色,检测结果为非洲猪瘟病毒阴性。 8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,步骤2)中所述LAMP扩增反应使用的反应体系以25μL计包括:待测非洲猪瘟病毒的基因组DNA2μL,引物组5μL,10×buffer 2.5μL,8U Bst DNA聚合酶1μL,稳定剂1.5μL,MnCl21.25μL,4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚1.25μL和DEPC水10.5μL; 所述10×buffer包括以下终浓度的成分:dNTPs14mM,MgSO420mM,Tris-HCl 200mM,(NH4)2SO4100mM,100mM KCl;以2.5μL计,所述10×buffer还包括0.025μL的Tween20; 所述引物组由以下终浓度的成分组成?#21644;?#24341;物F3和B3的浓度独立为0.2μM,内引物FIP和BIP浓度独立为1.6μM; 所述LAMP扩增反应的程序为:55~60℃恒温45~55min。 9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述LAMP扩增反应的程序为:58℃恒温50min。

说明书


一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组、试剂盒及应用
技术领域


本发明涉及病毒的分子生物学检测技术领域,尤其涉及一种用于非洲猪瘟病毒
LAMP检测的引物组、试剂盒及应用。


背景技术


非洲猪瘟(ASF)病由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起,是一种严重威胁养猪业的猪病毒
?#28304;?#26579;病,被我国列为一类动物疫病,是我国重点防控疫病。ASF的发病有特急性、急性、亚
急性和慢性的形式。由于猪感染的病毒的毒力不同,死亡率从0%到100%不?#21462;?#24613;性疾病的
特征是潜伏期短,大约3~7天,伴随高烧(可达42℃),并在5~10天内死亡。


非洲猪瘟病毒属于DNA病毒目,非洲猪瘟病毒科,非洲猪瘟病毒属成员,是一种具
有20面体结构,?#26412;?#20026;175~215nm,基因组全长170~190kb,含有151个开放阅读框,可编码
150~200种蛋白,具有囊膜的双?#19978;?#24615;DNA病毒。非洲猪瘟病毒是由病毒基因组、完成基因
早期转录所必须的酶以及一些DNA结合蛋白组成,结构蛋白较多,其中p72是主要的结构蛋
白之一,占病毒总蛋白量的1/3,而且该蛋白序列保守,抗原性佳,病毒感染后能够产生高滴
度的抗p72抗体,因此常被用作非洲猪瘟的血清学诊断;另外,根据p72基因末端一段478bp
的核酸序列,非洲猪瘟可分为23个基因型,如Benin97/1为基因I型,Malawi Li20/1为基因
VIII型,东非埃塞尔比亚分离株属于基因XXIII型。非洲猪瘟病毒基因组变异频?#20445;?#34920;现出
明显的遗传多样性。非洲猪瘟病毒不能够诱导产生中和抗体,因此还没有对血清型进行分
类。


在非洲猪瘟诊断方面,由于非洲猪瘟病毒不同毒株的毒力不同,患病猪临床症状
及病理变化差别大,难以确诊。目?#22467;?#23545;非洲猪瘟病毒检测主要通过以?#28388;?#31181;实验室检测方
法进行检测:病毒的分离鉴定;抗体免疫组化;酶联免疫吸附;?#37259;?#24405;聚合酶链式反应。其
中,病毒分离鉴定,体外扩增培养时间长,细胞培养对人员设备要求高,步骤繁琐;免疫组
化,检测病料组织中的病毒,特异性较差,容易出现假阳性,操作过程复杂,对病料保存、处
理等需要专业人?#33519;?#34892;操作,操作过程中的差异对结果影响较大,需要检测者具有一定经
验才能做出准?#25918;?#26029;;酶联免疫吸附,结果较为准确,但对样品要求较高,要求新鲜病料才
能检测准确,检测需要抗体,成本高,时间长,至少4~6小时才能有结果;?#37259;?#24405;聚合酶链式
反应,需要PCR仪等专业设备,需要在实验室进行操作。


发明内容


本发明的目的在于提供一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组、试剂盒及应
用,所述试剂盒用于非洲猪瘟病毒LAMP检测,检测效率高,灵敏度好,特异性强,并且阴阳性
结果区别明显,可通过颜色变化判读结果。


为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:


本发明提供了一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组,所述引物组包括外引物
F3、B3和内引物FIP、BIP;所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述B3的核苷酸序列如
SEQ ID NO:2所示;所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;所述BIP的核苷酸序列如SEQ
ID NO:4所示。


本发明?#22266;?#20379;了一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的试剂盒,所述试剂盒包括上述
方案所述引物组。


优选的,所述试剂盒还包括10×buffer、Bst DNA聚合酶、稳定剂、MnCl
2、4-(2-吡
啶偶氮)间苯二酚和DEPC水。


优选的,所述稳定剂为甜菜碱溶液;所述甜菜碱溶液中甜菜碱的浓度为4~6M。


优选的,所述试剂盒中还包括阳性对照品和阴性对照品。


优选的,所述阳性对照品为非洲猪瘟病毒基因组DNA;所述阴性对照品为双蒸水。


本发明?#22266;?#20379;了上述方案所述的试剂盒在非诊断目的的非洲猪瘟病毒LAMP检测
中的应用,所述应用包括以下步骤:


1)提取待测非洲猪瘟病毒的基因组DNA;


2)?#28304;?#27979;非洲猪瘟病毒DNA的基因组DNA为模板,利用权利要求1所述引物组中的
外引物F3、B3和内引物FIP、BIP,进行LAMP扩增反应,获得LAMP扩增产物;


3)观察反应液颜色,若反应液呈黄色,检测为非洲猪瘟病毒阳性;若反应液?#39135;?#32418;
色,检测结果为非洲猪瘟病毒阴性。


优选的,步骤2)中所述LAMP扩增反应使用的反应体系以25μL计包括:待测非洲猪
瘟病毒的基因组DNA 2μL,引物组5μL,10×buffer 2.5μL,8U Bst DNA聚合酶1μL,稳定剂
1.5μL,MnCl
21.25μL,4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚1.25μL和DEPC水10.5μL;


所述10×buffer包括以下终浓度的成分:dNTPs 14mM,MgSO
420mM,Tris-HCl
200mM,(NH
4)
2SO
4100mM,100mM KCl;以2.5μL计,所述10×buffer还包括0.025μL的Tween20;


所述引物组由以下终浓度的成分组成?#21644;?#24341;物F3和B3的浓度独立为0.2μM,内引物
FIP和BIP浓度独立为1.6μM;


所述LAMP扩增反应的程序为:55~60℃恒温45~55min。


优选的,所述LAMP扩增反应的程序为:58℃恒温50min。


本发明的有益效果:本发明提供了一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组、试
剂盒及应用,该试剂盒操作简单,对设备要求低,在检测时,只需将检测样品和检测反应液
放入58℃恒?#28388;?#28020;锅中孵育50min后即可完成扩增。并且,本发明的试剂盒具有灵敏度高和
特异性强的优点。此外,本发明通过肉眼观察反应液颜色变化判读结果,若反应液呈黄色,
检测为非洲猪瘟病毒阳性;若反应液?#39135;?#32418;色,检测结果为非洲猪瘟病毒阴性。本发明的方
法直观方便,且可有效避免反应后开盖造成的气溶胶污染。


附图说明:


图1表示实施例2中非洲猪瘟病毒的LAMP检测方法的特异性检测结果。


具体实施方式


本发明提供了一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组,所述引物组包括外引物
F3、B3和内引物FIP、BIP;所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;所述B3的核苷酸序列如
SEQ ID NO:2所示;所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示;所述BIP的核苷酸序列如SEQ
ID NO:4所示。


本发明中,所述引物组针对非洲猪瘟病毒PA104R基因片段的6个特异性位点设计;
所述PA104R的序列如SEQ ID NO:5所示。


本发明中,所述引物组用以定性检测纯非洲猪瘟病毒、病猪的脏器研磨液及血液
中的非洲猪瘟病毒。


本发明?#22266;?#20379;了一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的试剂盒,所述试剂盒包括上述
方案所述引物组;优选的还包括10×buffer、Bst DNA聚合酶、稳定剂、MnCl
2、4-(2-吡啶偶
氮)间苯二酚和DEPC水。


本发明中,所述引物组中外引物F3和B3的浓度独立优选为0.2μM;所述引物组中内
引物FIP和BIP浓度独立优选为1.6μM。在本发明的具体实施过程中,所述引物组中的引物均
由生工生物工程股份有限公司公司合成。


本发明中,所述稳定剂优选为甜菜碱溶液;所述甜菜碱溶液中甜菜碱的浓度为优
选为4~6M,更优选为5M。


本发明中,所述Bst DNA聚合酶的使用浓度优选为8~10U/μL;所述Bst DNA聚合酶
优选的购自于河南佰柯生物科技有限公司。


本发明中,所述MnCl
2的浓度优选为0.1~0.3M,更优选为0.2M;所述MnCl
2的作用是
与显色剂(4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚)结合,使显色剂显橙红色。


本发明中,所述4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚的浓度优选为8~12mM,更优选为10mM;
所述4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚的作用是作为显色剂。


本发明中,所述10×buffer优选为与上述方案所述Bst DNA聚合酶配?#36164;?#29992;的10
×buffer;所述10×buffer优选的购自于河南佰柯生物科技有限公司。


本发明的具体实施过程中,所述10×buffer优选的包括以下终浓度的成分:dNTPs
1.4mM,MgSO
420mM,Tris-HCl 200mM,(NH
4)
2SO
4100mM,100mM KCl;以2.5μL计,所述10×
buffer还包括0.0025μL的Tween20。


本发明中,所述试剂盒中优选的还包括阳性对照品和阴性对照品;所述阳性对照
品为非洲猪瘟病毒基因组DNA;所述阴性对照品为双蒸水。


本发明?#22266;?#20379;了上述方案所述的试剂盒在非诊断目的的非洲猪瘟病毒LAMP检测
中的应用,所述应用包括以下步骤:


1)提取待测非洲猪瘟病毒的基因组DNA;


2)?#28304;?#27979;非洲猪瘟病毒DNA的基因组DNA为模板,利用权利要求1所述引物组中的
外引物F3、B3和内引物FIP、BIP,进行LAMP扩增反应,获得LAMP扩增产物;


3)肉眼观察反应液颜色,若反应液呈黄色,检测为非洲猪瘟病毒阳性;若反应液呈
橙红色,检测结果为非洲猪瘟病毒阴性。


在本发明中,首先提取待测非洲猪瘟病毒的基因组DNA。本发明对所述待测非洲猪
瘟病毒的病毒类型没有特殊要求,任何病毒类型的非洲猪瘟病毒均可;本发明对所述待测
非洲猪瘟病毒的基因组的提取方法没有特殊限定,采用本领域常规的病毒基因组DNA提取
方法即可。


本发明在提取待测非洲猪瘟病毒的基因组DNA后,?#28304;?#27979;非洲猪瘟病毒的基因组
DNA为模板,利用上述方案所述引物组中的外引物F3、B3和内引物FIP、BIP,进行LAMP扩增反
应,获得LAMP扩增产物;所述LAMP扩增反应使用的反应体系以25μL计包括:待测非洲猪瘟病
毒的基因组DNA 2μL,引物组5μL,10×buffer 2.5μL,8U Bst DNA聚合酶1μL,稳定剂1.5μL,
MnCl
21.25μL,4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚1.25μL和DEPC水10.5μL。本发明中,所述LAMP的设
备优选为恒?#28388;?#28020;锅。


本发明中,所述引物组由以下终浓度的成分组成?#21644;?#24341;物F3和B3的浓度独立为0.2
μM,内引物FIP和BIP浓度独立为1.6μM。


本发明中,所述LAMP扩增反应的程序优选为:55~60℃恒温45~55min,更优选为
58℃恒温50min。


本发明在获得LAMP扩增产物后,肉眼观察反应液颜色,若反应液呈黄色,检测为非
洲猪瘟病毒阳性;若反应液?#39135;?#32418;色,检测结果为非洲猪瘟病毒阴性。本发明利用反应液颜
色检测LAMP扩增结果的4-(2-吡啶偶氮)间苯二酚与Mn
2+结合时,显橙红色;当反应呈阳性
时,反应过程中产生大量焦磷酸,使金属离子沉淀,无金属离子结合的指示剂呈浅黄色。


下面结合实施例对本发明提供的一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组、试剂
盒及应用进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护?#27573;?#30340;限定。


下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法,具体步骤可参见:《Molecμ
Lar Cloning:A Laboratory Manual》(Sambrook,J.,Russell,David W.,MolecμLar
Cloning:A Laboratory Manual,3rd edition,2001,NY,Cold Spring Harbor)。


实施例1一种利用LAMP技术检测非洲猪瘟病毒的方法


检测过程严格分区操作


一区:试剂准备区----准备所需试剂


二区:样?#23616;?#22791;区----待测样品及对照样品处理


三区:反应区-----扩增及结果分析


1、实验材料


感染非洲猪瘟病毒的病猪的脏器研磨液上清


2、基因组DNA提取(二区进行)


1)取200μL脏器研磨液上清,在750μL全血中加入等量裂解缓冲液A,混匀,12000r/
min离心30s,弃上清液。


2)用1.5mL裂解缓冲液A悬起沉淀,再重复离心1次,弃上清液。


3)用117μL裂解缓冲液B溶解沉淀,70℃作用5min,待冷却至55℃时加入3μL蛋白酶
K,并保温1h消化细胞,95℃10min灭活蛋白酶K。


4)加入2mol/L的KCL溶液30μL,冰溶5min。


5)12000r/min离心5min,弃上清液得到DNA模板,即获得病毒DNA。其中:裂解缓冲
液A由320mmol/L蔗糖、10mmol/LTris-HCl(pH 7.6)、5mmol/L MgCl
2和1%Triton-X-100组
成;裂解缓冲液B由10mmol/L Tris-HCl(pH 7.6)、1%SDS组成;蛋白酶K(25mg/ml),ddH
2O配
制,-20℃保存。


3、LAMP扩增引物组


用于对非洲猪瘟病毒进行LAMP检测的引物序列如下:


外引物F3:5’-3’CAAAATGCTTTAAAGCACAATCA,如SEQ ID NO:1所示;


外引物B3:5’-3’TCATGAACAGGTTTCAATGC,如SEQ ID NO:2所示;


内引物FIP:5’-3’


GCGAGCAGGTTTAGCTTTCAC-GAAGTTATTATACCACCCGGAAT,如SEQ ID NO:3所示;


内引物:BIP5’-3’


CCATAACCCCGCAACAGGAG-ACGGCTTTATGTTCAGGC,


如SEQ ID NO:4所示;


上述引物由生工生物工程股份有限公司公司合成。


4、LAMP扩增


试剂盒内反应液、引物、显色剂等使用前室温融化混?#21462;?br>

设所需LAMP反应管数为n(n=样品数+1阳性对照+1阴性对照),?#25239;?#21453;应体系参见
表1:


表1 LAMP反应体系






按?#25239;?#25152;需量×n计算?#37238;?#35797;剂用量,加入一洁净1.5mL EP管中,混合均匀,
2000r/min离心10s,向PCR 8连管中分别加入23μL上述混合液。(一区进行)


移至二区加样。


向上述各管中?#27492;?#24207;加入阴性对照、待检测模板、阳性对照各2μL,盖紧管盖做好
标记,移至反应区。


58℃恒温反应50min(三区进行)。


结果判断


取出反应管,冷却至室温,2000r/min离心10s,观察颜色变化。在阴性对照反应管
液体为橙红色,阳性对照反应管呈浅黄色条件下:


待检测样品呈黄色,该样品结果为非洲猪瘟病毒阳性;


待检测样品?#39135;?#33394;,该样品结果为非洲猪瘟病毒阴性;


若阴阳性对照反应结果与上述情况不符,则本次检测结果无效,应重新检测。


实施例2非洲猪瘟病毒的LAMP检测方法的特异性检测


使用本发明实施例1中的试剂盒对非洲猪瘟病毒样品、猪蓝耳病毒、猪?#24863;?#30149;毒样
本、健康猪样本进行检测。


1)对非洲猪瘟病毒、蓝耳病毒、猪?#24863;?#30149;毒感染的猪样本进行取样,取0.1g组织,
在750μL全血中加入等量裂解缓冲液A,混匀,12000r/min离心30s,弃上清液。


2)用1.5mL裂解缓冲液A悬起沉淀,再重复离心1次,弃上清液。


3)用117μL裂解缓冲液B溶解沉淀,70℃作用5min,待冷却至55℃时加入3μL蛋白酶
K,并保温1h消化细胞,95℃10min灭活蛋白酶K。


4)加入2mol/L的KCL溶液30μL,冰溶5min。


5)12000r/min离心5min,弃上清液做DNA模板。即获得病毒DNA。


其中:裂解缓冲液A由320mmol/L蔗糖、10mmol/L Tris-HCl(pH 7.6)、5mmol/L
MgCl
2和1%Triton-X-100组成;裂解缓冲液B由10mmol/L Tris-HCl(pH 7.6)、1%SDS组成;
蛋白酶K(25mg/mL),ddH
2O配制,-20℃保存。


核酸扩增


试剂盒内反应液、引物、显色剂等使用前室温融化混?#21462;?#35774;所需LAMP反应管数为n
(n=样品数+1阳性对照+1阴性对照),?#25239;?#21453;应体系参见表1。按?#25239;?#25152;需量×n计算?#37238;?#35797;
剂用量,加入一洁净1.5mLEP管中,混合均匀,2000r/min离心10s,向PCR 8连管中分别加入
23μL上述混合液(一区进行)。移至样品处理区加样。向上述各管中?#27492;?#24207;加入阴性对照、待
检测模板、阳性对照各2μL,盖紧管盖做好标记,移至反应区。


58℃恒温反应50min(三区进行)。


结果参见图1,其中1表示健康猪样本(阴性对照);2表示猪蓝耳病毒;3表示猪?#24863;?br>病毒样本;4表示非洲猪瘟样本。结果显示:只有非洲猪瘟样本显示为阳性结果,由反应前的
橙红色变为黄色,其他几种样本显示为阴性结果,即橙红色。可见,本发明的试剂盒具有很
强的特异性。


实施例3非洲猪瘟病毒的LAMP检测方法的灵敏度检测


将非洲猪瘟病毒PA104R基因进行人工合成,由上海生工生物工程有限公司合成,
连接至载体PMD18T中,转化大肠?#21496;鶧H5a,挑取单克隆到液体培养基中,利用质粒提取试剂
盒提取质粒,利用核酸蛋白分析仪测定OD260数值,根据公式换算质粒拷贝数。


(6.02×10
23)×(ng/μL×10
-9)/(DNAlength×660)=copies/μL.


测定质粒拷贝数为5x10
6copys/μL,对质粒进行10?#30701;?#24230;稀释,浓度分别为5x10
5、
5x10
4、5x10
3、5x10
2、5x10
1、5copies/μL,运用实施例1LAMP检测方法,相同反应条件和反应
体系,进行LAMP灵敏度测试和PCR灵敏度测试,其中LAMP方法可检测10copys以下样本,PCR
方法只能检测出5x10
2以上样本。可见,本发明的试剂盒具有很高的灵敏度。


由以上实施例可知,本发明提供了一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组、试
剂盒及应用,本发明的技术方案可实现在等温条件下快速、方便、高效、高特异、高灵敏地检
出非洲猪瘟病毒。


以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人
员?#27492;擔?#22312;不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润?#25105;?#24212;
视为本发明的保护?#27573;А?br>

序列表


\u0026lt;110\u0026gt; 许昌佰柯蛋白与基因工程研究院有限公司


\u0026lt;120\u0026gt; 一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组、试剂盒及应用


\u0026lt;160\u0026gt; 5


\u0026lt;170\u0026gt; SIPOSequenceListing 1.0


\u0026lt;210\u0026gt; 1


\u0026lt;211\u0026gt; 23


\u0026lt;212\u0026gt; DNA


\u0026lt;213\u0026gt; 人工序列(Artificial Sequence)


\u0026lt;400\u0026gt; 1


caaaatgctt taaagcacaa tca 23


\u0026lt;210\u0026gt; 2


\u0026lt;211\u0026gt; 20


\u0026lt;212\u0026gt; DNA


\u0026lt;213\u0026gt; 人工序列(Artificial Sequence)


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tcatgaacag gtttcaatgc 20


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\u0026lt;212\u0026gt; DNA


\u0026lt;213\u0026gt; 人工序列(Artificial Sequence)


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gcgagcaggt ttagctttca cgaagttatt ataccacccg gaat 44


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\u0026lt;213\u0026gt; 人工序列(Artificial Sequence)


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ccataacccc gcaacaggag acggctttat gttcaggc 38


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\u0026lt;212\u0026gt; DNA


\u0026lt;213\u0026gt; African swine fever virus


\u0026lt;400\u0026gt; 5


atgtcgacaa aaaaaaagcc cacaattacc aagcaagagc tttactcctt agtagcggca 60


gatacccagt taaataaagc attgattgaa agaatcttta caagccagca aaaaataatc 120


caaaatgctt taaagcacaa tcaagaagtt attataccac ccggaatcaa gttcaccgtc 180


gttacagtga aagctaaacc tgctcgccag ggccataacc ccgcaacagg agagcctatt 240


caaattaaag ccaagcctga acataaagcc gtaaagatac gagcattgaa acctgttcat 300


gatatgttaa attaa 315


关于本文
本文标题:一种用于非洲猪瘟病毒LAMP检测的引物组、试剂盒及应用.pdf
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