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一种萝卜抗病性的快速鉴定方法.pdf

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一种 萝卜 抗病性 快速 鉴定 方法
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摘要
申请专利号:

CN201910031999

申请日:

20190114

公开号:

CN109526443A

公开日:

20190329

当前法律状态:

实质审查的生效

有效性:

审中

法?#19978;?#24773;: 实质审查的生效
IPC分类号: A01G7/00;A01G22/25 主分类号: A01G7/00;A01G22/25
申请人: 长江师范学院
发明人: 李文博;高健;陈发波;王银平;李双兰;陈保卫;魏堯
地址: 408100 重庆市涪陵区聚贤大道16号
优先权:
专利代理机构: 61223 代理人: 李振瑞
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法律状态
申请(专利)号:

CN201910031999

授权公告号:

法律状态公告日:

20190423

法律状态类型:

实质审查的生效

摘要

本发明属于植物抗性鉴定技术领域,具体涉及一种萝卜抗病性的快速鉴定方法。包括收集具有病害的萝卜,获得病害污染物;将待检测品种种植于大田中;当萝卜生长至3~8片真叶期间接种病害污染物,3~4叶期、7~8叶期各一次,7~8叶期接种病害污染物后第10天调查病情指数;根据病情指数判定植物抗性。本发明的方法在天然病圃鉴定的基础上增加了人工接种病害污染物的操作,既加快了自然病圃的染病几率,又提高了萝卜抗性品种筛选?#26082;?#29575;。

权利要求书

1.一种萝卜抗病性的快速鉴定方法,其特征在于,包括以下步骤: S1,收集具有病害的萝卜,将萝卜切成萝卜丁后加入醋酸溶液中,浸泡,过滤,收集滤液,获得病害污染物; S2,将待检测品种种植于大田中,种?#21340;?#24335;如下:采用挖穴点种的方式种植,每穴1~2粒种子,株距10~20cm,行距10~30cm; S3,田间管理,当萝卜生长至3~8片真叶期间接种病害污染物,3~4叶期、7~8叶期各一次,7~8叶期接种病害污染物后第10天调查病情指数; 病情调查分?#24230;?#19979;:0级,无病;0.5级,叶面上有几个病班,且发病区小于1/4叶面积;1级叶上发病区大于等于1/4叶面积,且小于3/8叶面积;2级叶上发病区大于等于3/8叶面积,且小于1/2叶面积;3级叶上发病区大于等于1/2叶面积,且小于等于3/4叶面积,4级叶上发病区大于3/4叶面积; 病情指数=100×∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×4) 当病情指数>40?#20445;?#21017;待检测品种为感病品种;当40≤病情指数<20?#20445;?#21017;待检测品种为耐病品种;当20≤病情指数<10?#20445;?#21017;待检测品种为抗病品种;当病情指数≤10?#20445;?#21017;待检测品种为高抗病品种。 2.根据权利要求1所述的萝卜抗病性的快速鉴定方法,其特征在于,所述醋酸溶液的质量分数为1~3%,浸泡时间为5~20min。 3.根据权利要求2所述的萝卜抗病性的快速鉴定方法,其特征在于,萝卜丁与醋酸溶液的质量比为1:1~2。 4.根据权利要求3所述的萝卜抗病性的快速鉴定方法,其特征在于,接种病害污染物的方法如下:将病害污染物稀释1000倍后的稀释?#21495;?#26045;于叶面,每亩20~30L稀释液。 5.根据权利要求1所述的萝卜抗病性的快速鉴定方法,其特征在于,萝卜切丁后的萝卜丁边长为0.5~1cm。 6.根据权利要求5所述的萝卜抗病性的快速鉴定方法,其特征在于,步骤1过滤使用的工具为网筛,且网筛的孔?#26412;?#20026;0.5~2mm。 7.根据权利要求1所述的萝卜抗病性的快速鉴定方法,其特征在于,S1步骤包括以下步骤:将抗病性萝卜品种作为标准株A;将感病萝卜品种作为标准株B; S2步骤还包括以下步骤:将标准株A、标准株B及待检测品种种植于大田中,并且按照一行标准株A、一行标准株B、一行待检测品种的顺序依次重复排列种植萝卜; S3还包括以下步骤:7~8叶期接种病害污染物后第10天调查发病率; 发病率=发病总株数/调查总株数; 标准株A的发病率记为KA,标准株B的发病率记为KB,待检测品种的发病率记为KD;当KD≤KA,则待检测品种为抗病品种;当KD≥KB,则待检测品种为感病品种。 8.根据权利要求7所述的萝卜抗病性的快速鉴定方法,其特征在于,标准株A按照权利要求1方法鉴定出的病情指数为35~39,标准株B按照权利要求1方法鉴定出的病情指数为40~45;当KB<KD<KA,则待检测品种为感病品种。

说明书


一种萝卜抗病性的快速鉴定方法
技术领域


本发明属于植物抗性鉴定技术领域,具体涉及一种萝卜抗病性的快速鉴定方法。


背景技术


黑腐病、黑斑病等病害是萝卜种植常见病害,这些病害不仅?#26723;?#20102;萝卜的产量和
品种,而且影响了种植者的经济收入。解决病害一方面需要在萝卜种植过程中做好抗病消
杀工作,另一方面则需要积极培育萝卜抗病新品种。


现有技术进行新品种抗病鉴定大多将其种植于病圃中,利用自然诱发进行抗性鉴
定,然而当时或当地的气候条件并一定适宜诱发病害,常常导致鉴定工作无法顺利进行。为
?#31169;?#20915;该问题,“萝卜黑腐病苗期抗病性鉴定方法的研究,甘彩霞,湖北农业科学,第49卷第
12期”公开了一种萝卜黑腐病苗期室内人工接种鉴定方法,通过控?#24179;?#31181;浓度、温度等因
素,可顺利鉴定萝卜品种抗病性。但是该论文采用的供试菌种是从病区采样分离鉴定得到
的,只有HB1、WHHB1、JZHB1三个菌种,那么其鉴定出的抗病品种也只是抗这三个菌种的品
种,抗其他微生物的萝卜品种不一定能被筛选出?#30784;?#20877;者,该论文采用人工接种特定菌种来
诱发病害,与自然诱发的苗圃鉴定方式差别较大,引起萝卜黑腐病的菌种并不只这三个,其
也可能是多个菌种综合作用的结果,因此,甘彩霞等人的研究方法存在漏筛选出萝卜抗病
性品种的情况。


发明内容


本发明提供的一种萝卜抗病性的快速鉴定方法,在天然病圃鉴定的基础上增加了
人工接种病害污染物的操作,既加快了自然病圃的染病几率,又提高了萝卜抗性品种筛选
?#26082;?#29575;。


本发明的是提供一种萝卜抗病性的快速鉴定方法,包括以下步骤:


S1,收集具有病害的萝卜,将萝卜切成萝卜丁后加入醋酸溶液中,浸泡,过滤,收集
滤液,获得病害污染物;


S2,将待检测品种种植于大田中,种?#21340;?#24335;如下:采用挖穴点种的方式种植,每穴1
~2粒种子,株距10~20cm,行距10~30cm;


S3,田间管理,当萝卜生长至3~8片真叶期间接种病害污染物,3~4叶期、7~8叶
期各一次,7~8叶期接种病害污染物后第10天调查病情指数;


病情调查分?#24230;?#19979;:0级,无病;0.5级,叶面上有几个病班,且发病区小于1/4叶面
积;1级叶上发病区大于等于1/4叶面积,且小于3/8叶面积;2级叶上发病区大于等于3/8叶
面积,且小于1/2叶面积;3级叶上发病区大于等于1/2叶面积,且小于等于3/4叶面积,4级叶
上发病区大于3/4叶面积;


病情指数=100×∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×4)


当病情指数>40?#20445;?#21017;待检测品种为感病品种;当40≤病情指数<20?#20445;?#21017;待检测
品种为耐病品种;当20≤病情指数<10?#20445;?#21017;待检测品种为抗病品种;当病情指数≤10?#20445;?br>则待检测品种为高抗病品种。


优选的,上述萝卜抗病性的快速鉴定方法,所述醋酸溶液的质量分数为1~3%,浸
泡时间为5~20min。


优选的,上述萝卜抗病性的快速鉴定方法,萝卜丁与醋酸溶液的质量比为1:1~2。


优选的,上述萝卜抗病性的快速鉴定方法,接种病害污染物的方法如下:将病害污
染物稀释1000倍后的稀释?#21495;?#26045;于叶面,每亩20~30L稀释液。


优选的,上述萝卜抗病性的快速鉴定方法,萝卜切丁后的萝卜丁边长为0.5~1cm。


优选的,上述萝卜抗病性的快速鉴定方法,步骤1过滤使用的工具为网筛,且网筛
的孔?#26412;?#20026;0.5~2mm。


优选的,上述萝卜抗病性的快速鉴定方法,S1步骤包括以下步骤:将抗病性萝卜品
种作为标准株A;将感病萝卜品种作为标准株B;


S2步骤还包括以下步骤:将标准株A、标准株B及待检测品种种植于大田中,并且按
照一行标准株A、一行标准株B、一行待检测品种的顺序依次重复排列种植萝卜;


S3还包括以下步骤:7~8叶期接种病害污染物后第10天调查发病率;


发病率=发病总株数/调查总株数;


标准株A的发病率记为KA,标准株B的发病率记为KB,待检测品种的发病率记为KD;
当KD≤KA,则待检测品种为抗病品种;当KD≥KB,则待检测品种为感病品种。


优选的,上述萝卜抗病性的快速鉴定方法,标准株A按照权利要求1方法鉴定出的
病情指数为35~39,标准株B按照权利要求1方法鉴定出的病情指数为40~45;当KB<KD<
KA,则待检测品种为感病品种。


与现有技术相比,本发明的萝卜抗病性的快速鉴定方法,具有以下有益效果:


本发明在天然病圃鉴定的基础上增加了人工接种病害污染物的操作,所接种的菌
株来自本身具有病害的萝卜,需要鉴定哪种病?#20445;?#21017;选择具有哪种病害的萝卜来制备病害
污染物,如果选择的萝卜同?#26412;?#26377;两种以上病害,那么可同时坚定品种的多种病抗性,提高
了萝卜抗性品种筛选?#26082;?#29575;。本发明的方法也能加快了自然病圃的染病几率。


本发明采用醋酸溶液的原因是提高微生物的成活率和繁殖速率,研究表明,采用
质量分数为1~3%的醋酸溶液保存致萝卜黑腐病的油菜黄单胞杆菌?#20445;?天后油菜黄单胞
杆菌的数量级由10
2增加到10
6;而采用无菌水保存致萝卜黑腐病的油菜黄单胞杆菌?#20445;?天
后油菜黄单胞杆菌的数量级由10
2增加到10
5。


具体实施方式


下面结合具体实施例对本发明进行详细说明,但不应理解为本发明的限制。下列
实施例中未注明具体条件的试验方法,通常按照常规条件操作,由于不涉及发明点,故不对
其步骤进行详?#35813;?#36848;。


实施例1


一种萝卜抗病性的快速鉴定方法,包括以下步骤:


S1,收集具有黑腐病害的萝卜,将萝卜切成萝卜丁后加入质量分数为1%的醋酸溶
液中,萝卜切丁后的萝卜丁边长(最大宽度计)为0.5~0.7cm,萝卜丁与醋酸溶液的质量比
为1:2,浸泡5min,过滤,过滤使用的工具为网筛,且网筛的孔?#26412;?#20026;1mm,收集滤液,获得病
害污染物;


S2,将待检测品种露头青萝卜(已知抗黑腐病,且该品种综合抗病性强)种植于大
田中,种?#21340;?#24335;如下:采用挖穴点种的方式种植,每穴2粒种子,株距10cm,行距10cm;


S3,田间管理,当萝卜生长至3~8片真叶期间接种病害污染物,3~4叶期、7~8叶
期各一次,接种病害污染物的方法如下:将病害污染物稀释1000倍后的稀释?#21495;?#26045;于叶面,
每亩20L稀释液;


7~8叶期接种病害污染物后第10天调查病情指数;


病情调查分?#24230;?#19979;:0级,无病;0.5级,叶面上有几个病班,且发病区小于1/4叶面
积;1级叶上发病区大于等于1/4叶面积,且小于3/8叶面积;2级叶上发病区大于等于3/8叶
面积,且小于1/2叶面积;3级叶上发病区大于等于1/2叶面积,且小于等于3/4叶面积,4级叶
上发病区大于3/4叶面积;


本实施例共计调查100株,其中0级24株,0.5级40株,1级17株,2级13株,3级5株,4
级1株。


病情指数=100×∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×4)=100×(24×0+
40×0.5+17×1+13×2+5×3+1×4)/(100×4)=20.5


经本方法鉴定,露头青萝卜为抗病品种,与目前公认的结果一致。


实施例2


一种萝卜抗病性的快速鉴定方法,包括以下步骤:


S1,收集具有黑腐病害的萝卜,将萝卜切成萝卜丁后加入质量分数为3%的醋酸溶
液中,萝卜切丁后的萝卜丁边长(最大宽度计)为0.8~1cm,萝卜丁与醋酸溶液的质量比为
1:1,浸泡20min,过滤,过滤使用的工具为网筛,且网筛的孔?#26412;?#20026;2mm,收集滤液,获得病害
污染物;


S2,将待检测品种满堂红、心里美、91-1萝卜(已知抗芜菁花叶病毒、霜霉病,但不
抗黑腐病)种植于大田中,种?#21340;?#24335;如下:采用挖穴点种的方式种植,每穴1粒种子,株距
15cm,行距30cm;


S3,田间管理,当萝卜生长至3~8片真叶期间接种病害污染物,3~4叶期、7~8叶
期各一次,接种病害污染物的方法如下:将病害污染物稀释1000倍后的稀释?#21495;?#26045;于叶面,
每亩30L稀释液;


7~8叶期接种病害污染物后第10天调查病情指数;


病情调查分?#24230;?#19979;:0级,无病;0.5级,叶面上有几个病班,且发病区小于1/4叶面
积;1级叶上发病区大于等于1/4叶面积,且小于3/8叶面积;2级叶上发病区大于等于3/8叶
面积,且小于1/2叶面积;3级叶上发病区大于等于1/2叶面积,且小于等于3/4叶面积,4级叶
上发病区大于3/4叶面积;


本实施例共计调查100株,其中0级15株,0.5级14株,1级16株,2级19株,3级21株,4
级15株。


病情指数=100×∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×4)=100×(15×0+
14×0.5+16×1+19×2+21×3+15×4)/(100×4)=46.0


经本方法鉴定,满堂红心里美91-1萝卜为感病品种,与目前公认的结果一致。


实施例3


一种萝卜抗病性的快速鉴定方法,包括以下步骤:


S1,收集具有黑斑病害的萝卜,将萝卜切成萝卜丁后加入质量分数为4%的醋酸溶
液中,萝卜切丁后的萝卜丁边长(最大宽度计)为1.1~1.3cm,萝卜丁与醋酸溶液的质量比
为1:3,浸泡15min,过滤,过滤使用的工具为网筛,且网筛的孔?#26412;?#20026;0.5mm,收集滤液,获得
病害污染物;


S2,将待检测品种满堂红、心里美、91-1萝卜(已知抗芜菁花叶病毒、霜霉病,但不
抗黑斑病)种植于大田中,种?#21340;?#24335;如下:采用挖穴点种的方式种植,每穴2粒种子,株距
20cm,行距20cm;


S3,田间管理,当萝卜生长至3~8片真叶期间接种病害污染物,3~4叶期、7~8叶
期各一次,接种病害污染物的方法如下:将病害污染物稀释1000倍后的稀释?#21495;?#26045;于叶面,
每亩25L稀释液;


7~8叶期接种病害污染物后第10天调查病情指数;


病情调查分?#24230;?#19979;:0级,无病;0.5级,叶面上有几个病班,且发病区小于1/4叶面
积;1级叶上发病区大于等于1/4叶面积,且小于3/8叶面积;2级叶上发病区大于等于3/8叶
面积,且小于1/2叶面积;3级叶上发病区大于等于1/2叶面积,且小于等于3/4叶面积,4级叶
上发病区大于3/4叶面积;


本实施例共计调查100株,其中0级10株,0.5级16株,1级21株,2级28株,3级16株,6
级9株。


病情指数=100×∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×4)=100×(10×0+
16×0.5+21×1+28×2+16×3+9×4)/(100×4)=42.2


经本方法鉴定,满堂红心里美91-1萝卜为感病品种,与目前公认的结果一致。


实施例4


一种萝卜抗病性的快速鉴定方法,包括以下步骤:


S1,收集具有黑腐病害的萝卜,将萝卜切成萝卜丁后加入质量分数为1%的醋酸溶
液中,萝卜切丁后的萝卜丁边长(最大宽度计)为0.5~0.7cm,萝卜丁与醋酸溶液的质量比
为1:1,浸泡30min,过滤,过滤使用的工具为网筛,且网筛的孔?#26412;?#20026;0.4mm,收集滤液,获得
病害污染物;


将抗病性萝卜品种露头青萝卜作为标准株A;将感病萝卜品种满堂红、心里美、91-
1萝卜作为标准株B;


S2,将标准株A、标准株B及待检测品种喜诺?#21512;那?#29577;水果青萝卜(已知抗黑腐病,
且该品种综合抗病性强)种植于大田中,并且按照一行标准株A、一行标准株B、一行待检测
品种的顺序依次重复排列种植萝卜;种?#21340;?#24335;如下:采用挖穴点种的方式种植,每穴2粒种
子,株距25cm,行距35cm;


S3,田间管理,当萝卜生长至3~8片真叶期间接种病害污染物,3~4叶期、7~8叶
期各一次,接种病害污染物的方法如下:将病害污染物稀释1000倍后的稀释?#21495;?#26045;于叶面,
每亩20L稀释液;


7~8叶期接种病害污染物后第10天调查病情指数;


病情调查分?#24230;?#19979;:0级,无病;0.5级,叶面上有几个病班,且发病区小于1/4叶面
积;1级叶上发病区大于等于1/4叶面积,且小于3/8叶面积;2级叶上发病区大于等于3/8叶
面积,且小于1/2叶面积;3级叶上发病区大于等于1/2叶面积,且小于等于3/4叶面积,4级叶
上发病区大于3/4叶面积;


本实施例共计调查100株。


标准株A的发病率=发病总株数/调查总株数=75%


标准株B的发病率=发病总株数/调查总株数=85%


待测品种的发病率=发病总株数/调查总株数=71%


经本方法鉴定,喜诺?#21512;那?#29577;水果青萝卜为抗病品种,与目前公认的结果一致。


需要说明的是,本发明实施例1~4中所述及的“田间管理”方式如下:采取常规的
施肥、除草、翻地、灌水等操作。


需要说明的是,当本发明给出数值范围?#20445;?#24212;理解,除非本发明另有说明,每个数
值范围的两个端点以及两个端点之间?#39759;?#19968;个数值均可选用。除非另外定义,本发明中使
用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。尽管已描述了本发
明的优选实施例,但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念,则可对这些实施例
作出另外的变更和修改。所以,所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明
范围的所有变更和修改。


显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种?#20137;?#21644;变型而不脱离本发明的精
神和范围。这样,?#28909;?#26412;发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围
之内,则本发明也意?#21450;?#21547;这些?#20137;?#21644;变型在内。


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