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一种用萝卜苷生产高纯度莱菔素的方法.pdf

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一种 萝卜 生产 纯度 莱菔 方法
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摘要
申请专利号:

CN201910029436

申请日:

20190113

公开号:

CN109593798A

公开日:

20190409

当前法律状态:

公开

有效性:

审中

法?#19978;?#24773;: 公开
IPC分类号: C12P13/00 主分类号: C12P13/00
申请人: 重庆工商大学
发明人: 张杰;徐萌萌;刘学成;张桂芝;黄莉珠
地址: 400067 重庆市南岸区学府大道19号
优先权:
专利代理机构: 代理人:
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法律状态
申请(专利)号:

CN201910029436

授权公告号:

法律状态公告日:

20190409

法律状态类?#20572;?/td>

公开

摘要

本发明属于生产莱菔素的技术领域,特别涉及一种用萝卜苷生产高纯度莱菔素的方法。本发明方法以萝卜苷、黑芥?#29992;浮?#36879;析膜管为原料,经萝卜苷反应?#21495;?#21046;、反应体系制备、透析反应、反渗透浓缩、离心萃取等步骤生产得到莱菔素。本发明方法引入透析膜管进行透析反应,实现了产物与底物、酶的原位分离,显著提高了萝卜苷?#21040;?#29575;,实现了黑芥?#29992;?#30340;完全截留,可重复用于莱菔素的生产。本发明方法具有生产工艺简单、稳定、易于组织放大,产品收率高,设备投资成?#38236;停?#29983;产成?#38236;停?#36164;源综合利用率高,环境友好等特点。采用本发明方法制备出的莱菔素具有纯度高、无溶剂残留、性能稳定等特点,可广泛应用于医药、?#31216;?#21644;日化等行业。

权利要求书

1.一种用萝卜苷生产高纯度莱菔素的方法,其特征在于具体方法步骤如下: (1)制备萝卜苷反应液 以市售的萝卜苷为原料,按照萝卜苷的质量︰纯化水的体积比为1 g︰300~800 mL的比例,将萝卜苷加入到纯化水中,再用质量分数为5~10%的硫酸溶液调节pH至3.0~4.5,搅拌均匀后,收集溶液备用,即为萝卜苷反应液,用作下一步处理; (2)制备萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系 以市售的黑芥?#29992;?#20026;原料,按照黑芥?#29992;俯U萝卜苷的质量比为1︰1000~5000的比例,将黑芥?#29992;?#32531;慢加入到萝卜苷反应液中,搅拌均匀后,即为萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系,收集备用;以市售截留分子量为200Da或250Da的透析膜管为原料,按照透析膜管的容量︰萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系的体积比为1︰0.3~0.6的比例,将萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系装于一端已用重配膜夹封闭的透析膜管中,然后将另一端也用重配膜夹封闭,就制备出萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系,用作下一步处理; (3)制备莱菔素粗液 第(2)步完成后,按照保温层析柱︰第(2)步制备出的萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系的体积比为1︰0.3~0.5的比例,先将萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系置于保温层析柱中,然后升温至25~35℃,就组装出透析膜管反应器,备用;再用质量分数为5~10%的硫酸溶液将纯化水调节至与第(1)步收集的萝卜苷反应液相同的pH,收集酸性纯化水;然后再将酸性纯化水?#33804;?#36879;析膜管反应器中,在酸性纯化水的?#33804;?#36895;度为透析膜管反应器体积的1~3倍/小时下,进行连续透析反应,直至流出液中无莱菔素为止,分别收集透析膜管反应器流出液和反应后的透析膜管反应器;对于收集的透析膜管反应器流出液,即为莱菔素粗液,用作下一步处理; (4)制备莱菔素浓缩液 第(3)步完成后,将第(3)步收集的莱菔素粗液?#33804;?#21453;渗透浓缩器中,在0.08~0.15MPa下,进行反渗透浓缩,直到反渗透截留液的体积减少至原体积的1~5%为止,分别收集反渗透透过液和反渗透截留液;对于收集的反渗透截留液,即为莱菔素浓缩液,用作下一步处理; (5)制备高纯度莱菔素 第(4)步完成后,按照第(4)步收集的莱菔素浓缩液︰乙酸乙酯或正?#21644;?#30340;体积比为1︰2~4的比例,将收集的莱菔素浓缩液与乙酸乙酯或正?#21644;橐源?#27969;方式?#33804;?#31163;心萃取机中,流速分别为30~50mL/min,离心萃取结束后,分别收集水相和油相;对于收集的油相,?#33804;?#21040;真?#24352;?#32553;器中,在真空度为0.08~0.095MPa、温度为30~40℃条件下,进行真?#24352;?#32553;,待无蒸发液成滴流出时继续浓缩3~6小时后停止,分别收集真?#24352;?#32553;蒸发液和真?#24352;?#32553;浓缩液;对于收集的真?#24352;?#32553;浓缩液,即为高纯度莱菔素;萝卜苷?#21040;?#29575;为92.7~95.1%,莱菔素收率为95.3~97.9%;莱菔素纯度为94.1~95.6%,无溶剂残留,在温度为-18℃下储存半年未发生?#21040;狻?/p>

说明书


一种用萝卜苷生产高纯度莱菔素的方法
技术领域


本发明属于生产莱菔素的技术领域,特别涉及一种用萝卜苷生产高纯度莱菔素的
方法。


背景技术


4-甲基亚磺酰基-3-丁烯基硫苷,俗称萝卜苷(Glucoraphenin,C
12H
21NO
10S
3,
435.5Da),是萝卜籽中含量最多的一种硫苷。黑芥?#29992;福∕yrosinase,EC 3.2.3.1)又称β-硫
代葡萄糖苷酶,主要分布于十?#21482;?#31185;植物的根、茎、?#19969;?#24188;苗及种子中。硫苷在黑芥?#29992;?#30340;催
化作用下,S-糖苷键断裂,形成D-葡萄糖、氢离子和不稳定的中间体糖苷配基,糖苷配基失
去硫酸根离子后通过Hoffmann或Lossen重排,生成具有生物活性的异硫氰酸酯或盐。萝卜
苷经黑芥?#29992;复?#21270;可生成4-异硫氰酸基-1-(甲基亚磺酰基)-1-丁烯,俗称莱菔素
(Sulforaphene,C
6H
9NOS
2,175.3Da),其具有很强的抗氧化、抗细胞突变、抗癌等生物活性,
应用前景十分广阔。


现有生产莱菔素的方法,如2017年10月17日授权公告的公告号为CN 105198782 B
“萝卜种子中莱菔素的提取和分离纯化方法”的发明专利,该专利公开的方法是:以萝卜种
子为原料,经冷冻干燥、粉碎、萝卜种子脱脂、酶解、萃取、浓缩等步骤得到莱菔素粗提物,然
后经制板、薄层层析等步骤进一步纯化得到莱菔素。该方法存在的主要缺点有:①以萝卜种
子为原料进行组织生产,工艺路线长、过程复杂,不便于规模化生产;②萝卜种子脱脂?#26041;冢?br>虽有助于提高后续的酶解效率,但是需要采用大量的乙醚,成本较高,同时造成了部分萝卜
苷的损失,?#26723;?#20102;莱菔素产率;③工艺中采用较大的相比进行莱菔素萃取,导致后续浓缩时
间长,莱菔素易发生?#21040;猓?#21516;时浓缩能耗较高;④采用薄层层析进行莱菔素的分离纯化,生
产能力有限,不适合工业化生产,而且有机试?#26009;?#32791;较多,污染严重。


发明内容


本发明的目的是针对现有生产莱菔素方法的不足之处,提供一种用萝卜苷生产高
纯度莱菔素的方法,该方法具有生产工艺简单、稳定、易于组织放大,产品收率高,设备投资
成?#38236;停?#29983;产成?#38236;停?#36164;源综合利用率高,环境友好等特点。采用本发明方法制备出的莱菔
素具有纯度高、无溶剂残留、性能稳定等特点。


本发明的机理是:将黑芥?#29992;?#21644;萝卜苷置于截留分子量为200Da或250Da的透析膜
管内,构建萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系,然后将萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应
体系置于保温层析柱中,组装出透析膜管反应器。在适?#23435;?#24230;及酸性条件,反应体系中的萝
卜苷被黑芥?#29992;复?#21270;?#21040;猓?#29983;成莱菔素、葡萄糖、硫酸根等主要产物。由于黑芥?#29992;?#20998;子量
为65~75kDa、萝卜苷分子量为435.5Da,均大于所用透析膜管截留分子量,因此黑芥?#29992;?#19982;
萝卜苷被有效截留于透析膜管内。同?#20445;?#24403;将透析膜管反应器中不断?#33804;?#32431;化水?#20445;?#29983;成的
莱菔素、葡萄糖等物质由于分子量小于所用透析膜管截留分子量,在一定扩散压下可以不
断缓慢穿过透析膜管,透析进入萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系外的纯化水中,使生
成物连续流出透析膜管反应器,从而分离得到莱菔素粗液。反应过程中,催化产物不断离开
萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系实现原位分离,有效?#26723;?#20102;产物对酶催化反应的?#31181;?br>作用,提高了萝卜苷的?#21040;?#29575;,?#27493;档?#20102;二次反应的发生,有助于提高莱菔素产率。将透析
膜管引入到反应体系中,也使得黑芥?#29992;?#21487;以重复使用,有效?#26723;?#20102;生产成本。采用反渗透
浓缩技术对莱菔素粗液进行浓缩,在一定压力下,溶剂及小分子物质可以透过膜,而莱菔素
被有效截留,从而达到浓缩与纯化莱菔素的效果。基于离心萃取技术对莱菔素浓缩液进行
萃取,离心力?#19978;?#33879;提高两相的分离效率,?#26723;?#20102;油相中的含水量,提高了莱菔素的稳定
性,而且由于正?#21644;?#25110;乙酸乙酯对莱菔素的选择性高,大大提高了莱菔素纯度。另外,将离
心萃取后的真?#24352;?#32553;操作时间延长,有效改善了莱菔素的溶剂残留,增加了产品安全性。


本发明的目的是这样实现的:一种用萝卜苷生产高纯度莱菔素的方法,以萝卜苷、
黑芥?#29992;浮?#36879;析膜管为原料,经萝卜苷反应?#21495;?#21046;、反应体系制备、透析反应、反渗透浓缩、
离心萃取等步骤生产得到莱菔素。其具体的方法步骤如下:


(1)制备萝卜苷反应液


以市售的萝卜苷为原料,按照萝卜苷的质量(g)︰纯化水的体积(mL)比为1︰300~800的
比例,将萝卜苷加入到纯化水中,再用质量分数为5~10%的硫酸溶液调节pH至3.0~4.5,搅
拌均匀后,收集溶液备用,即为萝卜苷反应液,用作下一步处理。


(2)制备萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系


以市售的黑芥?#29992;?#20026;原料,按照黑芥?#29992;俯U萝卜苷的质量比为1︰1000~5000的比例,将
黑芥?#29992;?#32531;慢加入到萝卜苷反应液中,搅拌均匀后,即为萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系,收集
备用。以市售截留分子量为200Da或250Da的透析膜管为原料,按照透析膜管的容量︰萝卜
苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系的体积比为1︰0.3~0.6的比例,将萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系装于一
端已用重配膜夹封闭的透析膜管中,然后将另一端也用重配膜夹封闭,就制备出萝卜苷-黑
芥?#29992;?透析膜管反应体系,用作下一步处理。


(3)制备莱菔素粗液


第(2)步完成后,按照保温层析柱︰第(2)步制备出的萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应
体系的体积比为1︰0.3~0.5的比例,先将萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系置于保温层
析柱中,然后升温至25~35℃,就组装出透析膜管反应器,备用。再用质量分数为5~10%的
硫酸溶液将纯化水调节至与第(1)步收集的萝卜苷反应液相同的pH,收集酸性纯化水。然后
再将酸性纯化水?#33804;?#36879;析膜管反应器中,在酸性纯化水的?#33804;?#36895;度为透析膜管反应器体积
的1~3倍/小时下,进行连续透析反应,直至流出液中无莱菔素为止,分别收集透析膜管反
应器流出液和反应后的透析膜管反应器。对于收集的反应后的透析膜管反应器,含有黑芥
?#29992;福?#25353;照第(1)步的条件补充萝卜苷后可继续重复使用;对于收集的透析膜管反应器流出
液,即为莱菔素粗液,用作下一步处理。


(4)制备莱菔素浓缩液


第(3)步完成后,将第(3)步收集的莱菔素粗液?#33804;?#21453;渗透浓缩器中,在0.08~0.15MPa
下,进行反渗透浓缩,直到反渗透截留液的体积减少至原体积的1~5%为止,分别收集反渗
透透过液和反渗透截留液。对于收集的反渗透透过液,经调节pH后,可作为酸性纯化水继续
使用;对于收集的反渗透截留液,即为莱菔素浓缩液,用作下一步处理。


(5)制备高纯度莱菔素


第(4)步完成后,按照第(4)步收集的莱菔素浓缩液︰乙酸乙酯或正?#21644;?#30340;体积比为1︰2
~4的比例,将收集的莱菔素浓缩液与乙酸乙酯或正?#21644;橐源?#27969;方式?#33804;?#31163;心萃取机中,流
速分别为30~50mL/min,离心萃取结束后,分别收集水相和油相。对于收集的水相,含有大
量葡萄糖及微量莱菔素等物质,经喷雾干燥后,可作为动物饲料添加剂使用。对于收集的油
相,?#33804;?#21040;真?#24352;?#32553;器中,在真空度为0.08~0.095MPa、温度为30~40℃条件下,进行真空
浓缩,待无蒸发液成滴流出时继续浓缩3~6小时后停止,分别收集真?#24352;?#32553;蒸发液和真空
浓缩浓缩液。对于收集的真?#24352;?#32553;蒸发液,主要为乙酸乙酯或正?#21644;椋?#21487;继续用于离心萃
取;对于收集的真?#24352;?#32553;浓缩液,即为高纯度莱菔素。萝卜苷?#21040;?#29575;为92.7~95.1%,莱菔素
收率为95.3~97.9%。莱菔素纯度为94.1~95.6%,无溶剂残留,在温度为-18℃下储存半年
未发生?#21040;狻?br>

本发明采用上述技术方案后,主要有以下效果:


1、在生产过程中引入透析膜管进行透析反应,实现了产物与底物、酶的原位分离,有效
?#26723;?#20102;产物?#31181;?#25928;应,显著提高了萝卜苷?#21040;?#29575;。


2、在生产过程中,采用透析膜管实现了黑芥?#29992;?#30340;完全截留,可重复用于莱菔素
的生产,大大?#26723;?#20102;生产成本。


3、工艺过程步骤少、易于组织生产、成?#38236;停?#32780;且透析膜管反应器灵活性强,可实
现柔性化生产。


4、离心萃取技术的采用,有效改善了水相与油相的分离效率,?#26723;?#20102;莱菔素含水
量,提高了产品稳定性,而且具有处理量大、效率高等特点。


5、在生产过程中,?#23454;?#25552;高真?#24352;?#32553;时长,起到?#31169;档?#28342;剂残留的作用,提高了产
品安全性。


6、反渗透与离心萃取技术有效提高了生产效率和莱菔素纯度,而且具有节能降耗
的优点。


采用本发明方法制备的产品,可广泛应用于医药、?#31216;?#21644;日化等行业。


具体实施方式


下面结合具体实施方式,进一步说明本发明。


实施例1


一种用萝卜苷生产高纯度莱菔素的方法,具体方法步骤如下:


(1)制备萝卜苷反应液


以市售的萝卜苷为原料,按照萝卜苷的质量(g)︰纯化水的体积(mL)比为1︰300的比例,
将萝卜苷加入到纯化水中,再用质量分数为5%的硫酸溶液调节pH至3.0,搅拌均匀后,收集
溶液备用,即为萝卜苷反应液,用作下一步处理。


(2)制备萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系


以市售的黑芥?#29992;?#20026;原料,按照黑芥?#29992;俯U萝卜苷的质量比为1︰1000的比例,将黑芥子
酶缓慢加入到萝卜苷反应液中,搅拌均匀后,即为萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系,收集备用。以
市售截留分子量为200Da的透析膜管为原料,按照透析膜管的容量︰萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应
体系的体积比为1︰0.3的比例,将萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系装于一端已用重配膜夹封闭的
透析膜管中,然后将另一端也用重配膜夹封闭,就制备出萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应
体系,用作下一步处理。


(3)制备莱菔素粗液


第(2)步完成后,按照保温层析柱︰第(2)步制备出的萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应
体系的体积比为1︰0.3的比例,先将萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系置于保温层析柱
中,然后升温至25℃,就组装出透析膜管反应器,备用。再用质量分数为5%的硫酸溶液将纯
化水调节至与第(1)步收集的萝卜苷反应液相同的pH,收集酸性纯化水。然后再将酸性纯化
水?#33804;?#36879;析膜管反应器中,在酸性纯化水的?#33804;?#36895;度为透析膜管反应器体积的1倍/小时
下,进行连续透析反应,直至流出液中无莱菔素为止,分别收集透析膜管反应器流出液和反
应后的透析膜管反应器。对于收集的反应后的透析膜管反应器,含有黑芥?#29992;福?#25353;照第(1)
步的条件补充萝卜苷后可继续重复使用;对于收集的透析膜管反应器流出液,即为莱菔素
粗液,用作下一步处理。


(4)制备莱菔素浓缩液


第(3)步完成后,将第(3)步收集的莱菔素粗液?#33804;?#21453;渗透浓缩器中,在0.08MPa下,进
行反渗透浓缩,直到反渗透截留液的体积减少至原体积的1%为止,分别收集反渗透透过液
和反渗透截留液。对于收集的反渗透透过液,经调节pH后,可作为酸性纯化水继续使用;对
于收集的反渗透截留液,即为莱菔素浓缩液,用作下一步处理。


(5)制备高纯度莱菔素


第(4)步完成后,按照第(4)步收集的莱菔素浓缩液︰乙酸乙酯的体积比为1︰2的比例,
将收集的莱菔素浓缩液与乙酸乙酯?#28304;?#27969;方式?#33804;?#31163;心萃取机中,流速分别为30mL/min,
离心萃取结束后,分别收集水相和油相。对于收集的水相,含有大量葡萄糖及微量莱菔素等
物质,经喷雾干燥后,可作为动物饲料添加剂使用。对于收集的油相,?#33804;?#21040;真?#24352;?#32553;器中,
在真空度为0.08MPa、温度为30℃条件下,进行真?#24352;?#32553;,待无蒸发液成滴流出时继续浓缩3
小时后停止,分别收集真?#24352;?#32553;蒸发液和真?#24352;?#32553;浓缩液。对于收集的真?#24352;?#32553;蒸发液,主
要为乙酸乙酯,可继续用于离心萃取;对于收集的真?#24352;?#32553;浓缩液,即为高纯度莱菔素。萝
卜苷?#21040;?#29575;为92.7%,莱菔素收率为95.3%。莱菔素纯度为94.1%,无溶剂残留,在温度为-18
℃下储存半年未发生?#21040;狻?br>

实施例2


一种用萝卜苷生产高纯度莱菔素的方法,具体方法步骤如下:


(1)制备萝卜苷反应液


以市售的萝卜苷为原料,按照萝卜苷的质量(g)︰纯化水的体积(mL)比为1︰500的比例,
将萝卜苷加入到纯化水中,再用质量分数为8%的硫酸溶液调节pH至4.0,搅拌均匀后,收集
溶液备用,即为萝卜苷反应液,用作下一步处理。


(2)制备萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系


以市售的黑芥?#29992;?#20026;原料,按照黑芥?#29992;俯U萝卜苷的质量比为1︰3000的比例,将黑芥子
酶缓慢加入到萝卜苷反应液中,搅拌均匀后,即为萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系,收集备用。以
市售截留分子量为250Da的透析膜管为原料,按照透析膜管的容量︰萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应
体系的体积比为1︰0.4的比例,将萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系装于一端已用重配膜夹封闭的
透析膜管中,然后将另一端也用重配膜夹封闭,就制备出萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应
体系,用作下一步处理。


(3)制备莱菔素粗液


第(2)步完成后,按照保温层析柱︰第(2)步制备出的萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应
体系的体积比为1︰0.4的比例,先将萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系置于保温层析柱
中,然后升温至30℃,就组装出透析膜管反应器,备用。再用质量分数为8%的硫酸溶液将纯
化水调节至与第(1)步收集的萝卜苷反应液相同的pH,收集酸性纯化水。然后再将酸性纯化
水?#33804;?#36879;析膜管反应器中,在酸性纯化水的?#33804;?#36895;度为透析膜管反应器体积的2倍/小时
下,进行连续透析反应,直至流出液中无莱菔素为止,分别收集透析膜管反应器流出液和反
应后的透析膜管反应器。对于收集的反应后的透析膜管反应器,含有黑芥?#29992;福?#25353;照第(1)
步的条件补充萝卜苷后可继续重复使用;对于收集的透析膜管反应器流出液,即为莱菔素
粗液,用作下一步处理。


(4)制备莱菔素浓缩液


第(3)步完成后,将第(3)步收集的莱菔素粗液?#33804;?#21453;渗透浓缩器中,在0.11MPa下,进
行反渗透浓缩,直到反渗透截留液的体积减少至原体积的3%为止,分别收集反渗透透过液
和反渗透截留液。对于收集的反渗透透过液,经调节pH后,可作为酸性纯化水继续使用;对
于收集的反渗透截留液,即为莱菔素浓缩液,用作下一步处理。


(5)制备高纯度莱菔素


第(4)步完成后,按照第(4)步收集的莱菔素浓缩液︰正?#21644;?#30340;体积比为1︰3的比例,将
收集的莱菔素浓缩液与正?#21644;橐源?#27969;方式?#33804;?#31163;心萃取机中,流速分别为40mL/min,离心
萃取结束后,分别收集水相和油相。对于收集的水相,含有大量葡萄糖及微量莱菔素等物
质,经喷雾干燥后,可作为动物饲料添加剂使用。对于收集的油相,?#33804;?#21040;真?#24352;?#32553;器中,在
真空度为0.09MPa、温度为35℃条件下,进行真?#24352;?#32553;,待无蒸发液成滴流出时继续浓缩4小
时后停止,分别收集真?#24352;?#32553;蒸发液和真?#24352;?#32553;浓缩液。对于收集的真?#24352;?#32553;蒸发液,主要
为正?#21644;椋?#21487;继续用于离心萃取;对于收集的真?#24352;?#32553;浓缩液,即为高纯度莱菔素。萝卜苷
?#21040;?#29575;为94.2%,莱菔素收率为96.8%。莱菔素纯度为95.1%,无溶剂残留,在温度为-18℃下
储存半年未发生?#21040;狻?br>

实施例3


一种用萝卜苷生产高纯度莱菔素的方法,具体方法步骤如下:


(1)制备萝卜苷反应液


以市售的萝卜苷为原料,按照萝卜苷的质量(g)︰纯化水的体积(mL)比为1︰800的比例,
将萝卜苷加入到纯化水中,再用质量分数为10%的硫酸溶液调节pH至4.5,搅拌均匀后,收集
溶液备用,即为萝卜苷反应液,用作下一步处理。


(2)制备萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系


以市售的黑芥?#29992;?#20026;原料,按照黑芥?#29992;俯U萝卜苷的质量比为1︰5000的比例,将黑芥子
酶缓慢加入到萝卜苷反应液中,搅拌均匀后,即为萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系,收集备用。以
市售截留分子量为200Da的透析膜管为原料,按照透析膜管的容量︰萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应
体系的体积比为1︰0.6的比例,将萝卜苷-黑芥?#29992;?#21453;应体系装于一端已用重配膜夹封闭的
透析膜管中,然后将另一端也用重配膜夹封闭,就制备出萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应
体系,用作下一步处理。


(3)制备莱菔素粗液


第(2)步完成后,按照保温层析柱︰第(2)步制备出的萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应
体系的体积比为1︰0.5的比例,先将萝卜苷-黑芥?#29992;?透析膜管反应体系置于保温层析柱
中,然后升温至35℃,就组装出透析膜管反应器,备用。再用质量分数为10%的硫酸溶液将纯
化水调节至与第(1)步收集的萝卜苷反应液相同的pH,收集酸性纯化水。然后再将酸性纯化
水?#33804;?#36879;析膜管反应器中,在酸性纯化水的?#33804;?#36895;度为透析膜管反应器体积的3倍/小时
下,进行连续透析反应,直至流出液中无莱菔素为止,分别收集透析膜管反应器流出液和反
应后的透析膜管反应器。对于收集的反应后的透析膜管反应器,含有黑芥?#29992;福?#25353;照第(1)
步的条件补充萝卜苷后可继续重复使用;对于收集的透析膜管反应器流出液,即为莱菔素
粗液,用作下一步处理。


(4)制备莱菔素浓缩液


第(3)步完成后,将第(3)步收集的莱菔素粗液?#33804;?#21453;渗透浓缩器中,在0.15MPa下,进
行反渗透浓缩,直到反渗透截留液的体积减少至原体积的5%为止,分别收集反渗透透过液
和反渗透截留液。对于收集的反渗透透过液,经调节pH后,可作为酸性纯化水继续使用;对
于收集的反渗透截留液,即为莱菔素浓缩液,用作下一步处理。


(5)制备高纯度莱菔素


第(4)步完成后,按照第(4)步收集的莱菔素浓缩液︰乙酸乙酯的体积比为1︰4的比例,
将收集的莱菔素浓缩液与乙酸乙酯?#28304;?#27969;方式?#33804;?#31163;心萃取机中,流速分别为50mL/min,
离心萃取结束后,分别收集水相和油相。对于收集的水相,含有大量葡萄糖及微量莱菔素等
物质,经喷雾干燥后,可作为动物饲料添加剂使用。对于收集的油相,?#33804;?#21040;真?#24352;?#32553;器中,
在真空度为0.095MPa、温度为40℃条件下,进行真?#24352;?#32553;,待无蒸发液成滴流出时继续浓缩
6小时后停止,分别收集真?#24352;?#32553;蒸发液和真?#24352;?#32553;浓缩液。对于收集的真?#24352;?#32553;蒸发液,
主要为乙酸乙酯,可继续用于离心萃取;对于收集的真?#24352;?#32553;浓缩液,即为高纯度莱菔素。
萝卜苷?#21040;?#29575;为95.1%,莱菔素收率为97.9%。莱菔素纯度为95.6%,无溶剂残留,在温度为-
18℃下储存半年未发生?#21040;狻?br>

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本文标题:一种用萝卜苷生产高纯度莱菔素的方法.pdf
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