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一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法.pdf

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一种 利用 HPLC 测定 玫瑰花 维生素 含量 方法
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摘要
申请专利号:

CN201910029222

申请日:

20190112

公开号:

CN109541077A

公开日:

20190329

当前法律状态:

实质审查的生效

有效性:

审中

法?#19978;?#24773;: 实质审查的生效
IPC分类号: G01N30/02;G01N30/06 主分类号: G01N30/02;G01N30/06
申请人: 倪氏国际玫瑰产业股份有限公司
发明人: 倪庆伟;董博才;吴晓川;蔡旭东;薛洁;陈秀娟
地址: 441000 湖北省襄阳市枣阳市中兴大道北端
优先权:
专利代理机构: 42254 代理人: 彭成
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法律状态
申请(专利)号:

CN201910029222

授权公告号:

法律状态公告日:

20190423

法律状态类型:

实质审查的生效

摘要

本发明涉及玫瑰产品性能检测?#38469;?#39046;域,特别涉及一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,该方法能够方便、准确地对玫瑰花中的维生素C含量进行测定,同时,能够减少实验的偶然误差。其?#38469;?#35201;点包括S1?#21495;?#21046;维生素C标?#23478;海籗2:将维生素C标?#23478;合?#37322;至不同浓度,进?#21512;?#33394;谱检测,绘制标准曲线;S3:样品处理;S4:处理后的样?#26041;合?#33394;谱检测,并根据维生素C的标准曲线计算样品中维生素C含量。

权利要求书

1.一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,其特征在于,包括以下步骤: S1?#21495;?#21046;维生素C原液; S2:将维生素C原?#21512;?#37322;至不同浓度的维生素C标?#23478;海?#36827;?#21512;?#33394;谱检测,绘制标准曲线; S3:样品处理; S4:处理后的样品经微孔过滤,进?#21512;?#33394;谱检测,并根据维生素C的标准曲线计算样品中维生素C含量。 2.根据权利要求1所述的一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,其特征在于:步骤S2中,样品处理过程为,将样品放入粉碎机中,加入草酸,均?#30830;?#30862;后,滤纸过滤,滤液保留,待测。 3.根据权利要求2所述的一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,其特征在于:所使用草酸为质量浓度0.5%的草酸水溶液。 4.根据权利要求1所述的一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,其特征在于:步骤S2及S4中?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:C18 250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸钠;进样量:5μL。 5.根据权利要求4所述的一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,其特征在于:流动性A与B的比值为A:B=5:95。 6.根据权利要求1-5任一所述的一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,其特征在于:S3步骤中,进行样品处理时,向样品中加入氯化铝。 7.根据权利要求6所述的一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,其特征在于:氯化铝与样品的质量比为1:30。 8.根据权利要求1-5任一所述的一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,其特征在于:S3步骤中,进行样品处理时,向样品中加入硝酸胺钙。 9.根据权利要求8所述的一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,其特征在于?#21512;?#37240;胺钙与样品的质量比为1:45。

说明书


一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法
?#38469;?#39046;域


本发明属于玫瑰产品性能检测?#38469;?#39046;域,特别涉及一种利用HPLC测定玫瑰花中维
生素C含量的方法。


背景?#38469;?br>

玫瑰(Rosa rugosa)为蔷薇科、蔷薇属植物,其花形美色?#30465;?#33459;香浓郁,具有食用、
药用、保健、美容、观赏等多种用途,是我国十大名花之一,也是世界四大切花之一。


玫瑰花中含有维生素E及维生素C(简称V
C)等营养素,特别是维生素C,维生素C是
人类营养中最重要的维生素之一,它能增强人体抵抗力,预防坏血病,又称?#22815;?#34880;酸。因此,
测定玫瑰花中的维生素C的含量,对评定其营养价值有重要意义。


维生素C的测定方法有多种,包括容量法、比色法以及荧光光度法、电位法和紫外
分光光度法等,但是,各种方法均存在操作繁琐,偶然误差大?#28909;?#38519;。


发明内容


本发明的目的是提供一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,能够方便、
准确地对玫瑰花中的维生素C含量进行测定,同时,能够减少实验的偶然误差。


本发明的上述?#38469;?#30446;的是通过以下?#38469;?#26041;案得以实现的:


一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,包括以下步骤:


S1?#21495;?#21046;维生素C原液;


S2:将维生素C原?#21512;?#37322;至不同浓度的维生素C标?#23478;海?#36827;?#21512;?#33394;谱检测,绘制标准
曲线;


S3:样品处理;


S4:处理后的样品经微孔过滤,进?#21512;?#33394;谱检测,并根据维生素C的标准曲线计算
样品中维生素C含量。


进一步的,步骤S2中,样品处理过程为,将样品放入粉碎机中,加入草酸,均?#30830;?#30862;
后,滤纸过滤,滤液保留,待测。


进一步的,所使用草酸为质量浓度0.5%的草酸水溶液。


进一步的,步骤S2及S4中?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:C18 250mm×5mm,流速1ml/
min;检测波长:265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸钠;进样量:5μL。


进一步的,流动性A与B的比值为A:B=5:95。


进一步的,S3步骤中,进行样品处理时,向样品中加入氯化铝。


进一步的,氯化铝与样品的质量比为1:30。


进一步的,S3步骤中,进行样品处理时,向样品中加入硝酸胺钙。


进一步的,硝酸胺钙与样品的质量比为1:45。


本发明的有益效果是:


1.本发明提供的利用高效?#21512;?#33394;谱对玫瑰花中的维生素C含量进行测定的方法,
操作简单,且准确率高,重复性好。


2.本发明使用乙酸钠与甲醇配合做流动相,使最终维生素C的分离效果较好,单独
出峰,无明显拖峰现象。


3.本发明中在对样品处理时,在样品中加入氯化铝,氯化铝能够破坏玫瑰花中的
类黄酮类物质,类黄酮对维生素C具有保护作用,类黄酮被破坏,从而在对玫瑰花碾碎时,维
生素C大量流出,进而能够对样品中的维生素C含量进行更精确地测定。


4.本发明中在对样品处理时,在样品中加入硝酸胺钙,硝酸铵钙能够?#26723;涂够?#34880;
酸氧化酶的活性,从而,在维生素C流出后,减少维生素C的氧化,避免检测过程中,因维生素
C与空气接触被?#22815;?#34880;酸氧化酶氧化导致实验结果不准确。


具体实施方式


下面将结合具体实施例,对本发明的?#38469;?#26041;案进行清楚、完整地描述。显然,所描
述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明的实施例,本
领域普通?#38469;?#20154;员在没有做出创造性劳动前提下所获?#29611;?#25152;有其他实施例,?#38469;?#20110;本发明
保护的范围。


一种利用HPLC测定玫瑰花中维生素C含量的方法,具体如下各实施例。


实施例1


S1?#21495;?#21046;维生素C原液。准确称取0.2000g维生素C标准品,用超纯水定容至100mL容
量瓶中,此时维生素C浓度为2000mg/L。


S2:吸取2000mg/L维生素C原液,稀释5倍、10倍、20倍、50倍,配制成400mg/L、
200mg/L、100mg/L、50mg/L浓度标?#23478;骸?#23558;各浓度标?#23478;?#36827;?#21512;?#33394;谱进行检测,以标?#23478;号?br>度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线,建立回归方程。?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:
C18柱子,250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸
钠;流动性A与B的比值为A:B=5:95;进样量:5μL。


S3:样品处理。取100g样品,放入粉碎机中,加入200mL质量浓度为0.5%草酸水溶
液,均?#30830;?#30862;,滤纸过滤后,滤液保留,及时进行下一步检测。


S4:滤液经0.45μm微孔过滤,进?#21512;?#33394;谱检测,并根据维生素C的标准曲线计算样
品中维生素C含量。?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:C18 250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:
265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸钠;流动性A与B的比值为A:B=5:95;进样量:5μ
L。


实施例2


S1?#21495;?#21046;维生素C原液。准确称取0.2000g维生素C标准品,用超纯水定容至100mL容
量瓶中,此时维生素C浓度为2000mg/L。


S2:吸取2000mg/L维生素C原液,稀释5倍、10倍、20倍、50倍,配制成400mg/L、
200mg/L、100mg/L、50mg/L浓度标?#23478;骸?#23558;各浓度标?#23478;?#36827;?#21512;?#33394;谱进行检测,以标?#23478;号?br>度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线,建立回归方程。?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:
C18柱子,250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸
钠;流动性A与B的比值为A:B=5:95;进样量:5μL。


S3:样品处理。取100g样品,放入粉碎机中,加入200mL质量浓度为0.5%草酸水溶
液,均?#30830;?#30862;,滤纸过滤后,滤液保留24h后进行检测。


S4:滤液经0.45μm微孔过滤,进?#21512;?#33394;谱检测,并根据维生素C的标准曲线计算样
品中维生素C含量。?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:C18 250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:
265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸钠;流动性A与B的比值为A:B=5:95;进样量:5μ
L。


实施例3


S1?#21495;?#21046;维生素C原液。准确称取0.2000g维生素C标准品,用超纯水定容至100mL容
量瓶中,此时维生素C浓度为2000mg/L。


S2:吸取2000mg/L维生素C原液,稀释5倍、10倍、20倍、50倍,配制成400mg/L、
200mg/L、100mg/L、50mg/L浓度标?#23478;骸?#23558;各浓度标?#23478;?#36827;?#21512;?#33394;谱进行检测,以标?#23478;号?br>度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线,建立回归方程。?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:
C18柱子,250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸
钠;流动性A与B的比值为A:B=5:95;进样量:5μL。


S3:样品处理。取100g样品,放入粉碎机中,加入200mL质量浓度为0.5%草酸水溶
液,同时,加入氯化铝,氯化铝与样品的质量比为1:30,搅拌并均?#30830;?#30862;,滤纸过滤后,滤液
保留,及时进行下一步检测。


S4:滤液经0.45μm微孔过滤,进?#21512;?#33394;谱检测,并根据维生素C的标准曲线计算样
品中维生素C含量。?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:C18 250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:
265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸钠;流动性A与B的比值为A:B=5:95;进样量:5μ
L。


实施例4


S1?#21495;?#21046;维生素C原液。准确称取0.2000g维生素C标准品,用超纯水定容至100mL容
量瓶中,此时维生素C浓度为2000mg/L。


S2:吸取2000mg/L维生素C原液,稀释5倍、10倍、20倍、50倍,配制成400mg/L、
200mg/L、100mg/L、50mg/L浓度标?#23478;骸?#23558;各浓度标?#23478;?#36827;?#21512;?#33394;谱进行检测,以标?#23478;号?br>度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线,建立回归方程。?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:
C18柱子,250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸
钠;流动性A与B的比值为A:B=5:95;进样量:5μL。


S3:样品处理。取100g样品,放入粉碎机中,加入200mL质量浓度为0.5%草酸水溶
液,同时,加入硝酸胺钙,硝酸胺钙与样品的质量比为1:45,搅拌并均?#30830;?#30862;,滤纸过滤后,
滤液保留24h后进行检测。


S4:滤液经0.45μm微孔过滤,进?#21512;?#33394;谱检测,并根据维生素C的标准曲线计算样
品中维生素C含量。?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:C18 250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:
265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸钠;流动性A与B的比值为A:B=5:95;进样量:5μ
L。


实施例5


S1?#21495;?#21046;维生素C原液。准确称取0.2000g维生素C标准品,用超纯水定容至100mL容
量瓶中,此时维生素C浓度为2000mg/L。


S2:吸取2000mg/L维生素C原液,稀释5倍、10倍、20倍、50倍,配制成400mg/L、
200mg/L、100mg/L、50mg/L浓度标?#23478;骸?#23558;各浓度标?#23478;?#36827;?#21512;?#33394;谱进行检测,以标?#23478;号?br>度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线,建立回归方程。?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:
C18柱子,250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:265nm;流动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸
钠;流动性A与B的比值为A:B=5:95;进样量:5μL。


S3:样品处理。取100g样品,放入粉碎机中,加入200mL质量浓度为0.5%草酸水溶
液,同时,加入氯化铝和硝酸胺钙,氯化铝与样品的质量比为1:30,硝酸胺钙与样品的质量
比为1:45,搅拌并均?#30830;?#30862;,滤纸过滤后,滤液保留,及时进行下一步检测。


S4:滤液经0.45μm微孔过滤,进?#21512;?#33394;谱检测,并根据维生素C的标准曲线计算样
品中维生素C含量。样品中维生素C含量(mg/g)的具体计算为根据维生素C的峰面积,通过回
归方程计算出维生素C的浓度值,乘以样品体积200mL,再除以样品总质量100g。


?#21512;?#33394;谱条件为?#21512;?#33394;谱柱:C18 250mm×5mm,流速1ml/min;检测波长:265nm;流
动相A为甲醇,B为0.02moL/L乙酸钠;流动性A与B的比值为A:B=5:95;进样量:5μL。


本发明各实施例所使用仪器设备为Agilent 1260系列?#21512;?#33394;谱仪配有紫外检测
器;Agilent 1260自动进样器;溶剂过滤器,一次性注射器,0.45um过滤头。


检测结果













编号


回归方程


相关系数R
2


样品中V
C的峰面积


样品中V
C的含量(mg/g)




实施例1


Y=10.93x+362.73


R
2=0.99933


2695.02


0.427




实施例2


Y=10.38x+403.28


R
2=0.99832


1673.78


0.245




实施例3


Y=11.01x+572.73


R
2=0.99912


3321.87


0.499




实施例4


Y=10.88x+364.71


R
2=0.99741


2476.37


0.388




实施例5


Y=10.97x+462.53


R
2=0.99739


3210.55


0.501






各实施例中所用样品均为同批次采摘玫瑰花。实验结果显示,在该色谱条件下,维
生素C的保留时间为2.80min,该方法建立的回归方程,相关系数较高。实施例1与实施例3相
比,实施例3中在样品处理时加入了氯化铝,使得检测时,维生素C的峰面积明显提升,即,检
测到的维生素C含量有所提升,说明氯化铝的加入促进?#25628;?#21697;中维生素C的流出。实施例1与
实施例2相比,实施例2在对样品处理后,放置24h进行检测,发现维生素C含量显著下降,说
明样品中的维生素C被氧化。实施例2与实施例4相比,实施例4在对样品处理后加入硝酸胺
钙,然后放置24h进行检测,虽然检测结果还是低于实施例1中的含量,但是,与实施例2相
比,有明显提升,说明硝酸胺钙能够减弱维生素C的氧化。


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