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一种蜡样芽孢杆菌的培养方法及其专用培养基.pdf

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一种 芽孢 杆菌 培养 方法 及其 专用 培养基
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摘要
申请专利号:

CN201910025787

申请日:

20190111

公开号:

CN109536423A

公开日:

20190329

当前法律状态:

实质审查的生效

有效性:

审中

法?#19978;?#24773;: 实质审查的生效
IPC分类号: C12N1/20;C12R1/085 主分类号: C12N1/20;C12R1/085
申请人: 宁夏医科大学
发明人: 张新慧;张晓佳;张文晋;郎多勇;张瑜;周丽;高晓娟;余建强;付雪艳
地址: 750004 宁夏回族自治区银川市兴庆区胜利街1160号
优先权:
专利代理机构: 11245 代理人: 关畅
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法律状态
申请(专利)号:

CN201910025787

授权公告号:

法律状态公告日:

20190423

法律状态类型:

实质审查的生效

摘要

本发明公开了一种蜡样芽孢杆菌的培养方法及其专用培养基。培养基由葡萄糖、胰蛋白胨、KH2PO4和水组成。培养基中,葡萄糖、胰蛋白胨、KH2PO4和水的比例为1.0重量份:(4.5?6.5)重量份:(0.03?0.07)重量份:(92?95)重量份。采用本发明提供的培养基和优化前的培养基分别发酵培养蜡样芽孢杆菌;结果表明,与优化前的培养基相比,在相同的发酵时间下本发明提供的培养基可使蜡样芽孢杆菌生物量显著增加。由此可见,本发明提供的培养基更加适合蜡样芽孢杆菌的生长,可明?#36816;?#30701;发酵时间,大大?#26723;?#20102;生产成本。本发明具有重要的应用价值。

权利要求书

1.用于培养蜡样芽孢杆菌的培养基,包括葡萄糖、胰蛋白胨和KH2PO4。 2.如权利要求1所述的培养基,其特征在于:所述培养基还包括水。 3.如权利要求2所述的培养基,其特征在于:所述葡萄糖、所述胰蛋白胨、所述KH2PO4和所述水的比例为1.0重量份:(4.5-6.5)重量份:(0.03-0.07)重量份:(92-95)重量份。 4.如权利要求1至3任一所述的培养基,其特征在于:所述培养基由所述葡萄糖、所述胰蛋白胨、所述KH2PO4和所述水组成。 5.如权利要求4所述的培养基,其特征在于: 所述葡萄糖在所述培养基中的浓度为(8.0-12.0)g/L; 所述胰蛋白胨在所述培养基中的浓度为(45.0-65.0)g/L; 所述KH2PO4在所述培养基中的浓度为(0.3-0.7)g/L。 6.如权利要求5所述的培养基,其特征在于: 所述葡萄糖在所述培养基中的浓度为10g/L; 所述胰蛋白胨在所述培养基中的浓度为55g/L; 所述KH2PO4在所述培养基中的浓度为0.5g/L。 7.权利要求1至6任一所述的培养基在培养蜡样芽孢杆菌中的应用。 8.权利要求1至6任一所述的培养基在提高蜡样芽孢杆菌生物量中的应用。 9.一种蜡样芽孢杆菌的培养方法,包括如下?#34903;瑁?#37319;用权利要求1至6任一所述的培养基培养蜡样芽孢杆菌。 10.如权利要求9所述的方法,其特征在于:所述培养的条件为:28-32℃、170-230rpm振荡培养。

说明书


一种蜡样芽孢杆菌的培养方法及其专用培养基
技术领域


本发明属于生物技术领域,具体涉及一种蜡样芽孢杆菌的培养方法及其专用培养
基。


背景技术


蜡样芽孢杆菌为芽孢杆菌属(Bacillus)中的一种。菌体细胞杆状,末端方,成短或
长链,1.0-1.2×3.0-5.0μm。产芽孢,芽孢圆形或柱形,中生或近中生,1.0~ 1.5μm,孢囊无
明显膨大。革兰氏阳性菌,无荚膜,运动。菌落大,表面粗糙,扁平,?#36824;?#21017;。蜡样芽孢杆菌可
产生抗菌物质,?#31181;?#26377;害微生物的繁殖,降解土壤中的营养成分,改善生态环境;可产生细
菌蛋白酶;可用于麻脱胶,是各种抗生素抗菌活性的测定菌;可用于明胶液化、牛奶胨化、还
原硝酸盐、水解淀粉等等;还可制药,主要用于治疗肠炎、腹泻、肠功能紊乱。


目前,蜡样芽孢杆菌的工业化液体深层发酵工艺普遍存在着发酵水平偏低,芽孢
形成不一致,产?#20998;?#37327;不稳定?#28909;?#38519;。一般通过调整发酵过程中的温度、压力、通气搅拌等
工艺条件来提高有效活菌数量,对菌种的芽胞采用高温处理,使之在工业发酵过程中能同
步形成芽孢,从而提高芽孢形成的数量和比例,缩短发酵时间。然而这些方法实际操作起来
甚为麻烦,而?#19968;?#22686;加了生产成本。


发明内容


本发明的目的为提供适宜蜡样芽孢杆菌生长的培养基。


本发明首先保护一种用于培养蜡样芽孢杆菌的培养基,可包括葡萄糖、胰蛋白胨
和KH
2PO
4。


上述培养基还可包括水。


上述任一所述培养基中,所述葡萄糖、所述胰蛋白胨、所述KH
2PO
4和所述水的比例
可为1.0重量份:(4.5-6.5)重量份:(0.03-0.07)重量份:(92-95)重量份。


上述任一所述培养基中,所述葡萄糖、所述胰蛋白胨、所述KH
2PO
4和所述水的比例
具体可为1.0重量份:5.5重量份:0.05重量份:93重量份。


上述培养基中,所述葡萄糖、所述胰蛋白胨、所述KH
2PO
4和所述水的比例具体可为
1.0重量份:4.5重量份:0.03重量份:95重量份。


上述培养基中,所述葡萄糖、所述胰蛋白胨、所述KH
2PO
4和所述水的比例具体可为
1.0重量份:6.5重量份:0.07重量份:92重量份。


上述任一所述培养基具体可由所述葡萄糖、所述胰蛋白胨、所述KH
2PO
4和所述水组
成。


上述任一所述培养基中,所述葡萄糖在培养基中的浓度可为(8.0-12.0)g/L(如
(8.0-10.0)g/L、(10.0-12.0)g/L、8.0g/L、10.0g/L或12.0g/L)。所述胰蛋白胨在培养基中
的浓度可为(45.0-65.0)g/L(如(45.0-55.0)g/L、(55.0-65.0) g/L、45.0g/L、55.0g/L或
65.0g/L)。所述KH
2PO
4在培养基中的浓度为(0.3-0.7) g/L(如(0.3-0.5)g/L、(0.5-0.7)g/
L、0.3g/L、0.5g/L或0.7g/L)。


本发明还保护上述任一所述培养基在培养蜡样芽孢杆菌中的应用。


本发明还保护上述任一所述培养基在提高蜡样芽孢杆菌生物量中的应用。


上述应用中,所述“提高蜡样芽孢杆菌生物量”主要是蜡样芽孢杆菌适宜于在上述
任一所述培养基中生长造成的。


本发明还保护一种蜡样芽孢杆菌的培养方法,包括如下?#34903;瑁?#37319;用上述任一所述
的培养基培养蜡样芽孢杆菌。


上述方法中,所述培养的条件可为:28-32℃(如28-30℃、30-32℃、28℃、30℃或32
℃)、170-230rpm(如170-200rpm、200-230rpm、170rpm、200rpm或230rpm) 振荡培养。


上述任一所述蜡样芽孢杆菌具体可为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)G2。蜡样
芽孢杆菌(Bacillus cereus)G2已于2018年10月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员
会普通微生物中心(简称CGMCC,地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院 3号),保藏编号为
CGMCC No.16671。蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)G2的全称为蜡样芽孢杆菌(Bacillus
cereus)G2 CGMCC No.16671。


将蜡样芽孢杆菌接种至装有150mL优化前的培养基(由1.5重量份葡萄糖、1.5 重
量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份NaCl和96重量份水组成)或本发明提供的培养
基(由1.0重量份葡萄糖、5.5重量份胰蛋白胨、0.05重量份KH
2PO
4和 93重量份水组成)的三
角瓶中,然后置于恒?#20081;?#24202;,30℃、170rpm振荡培养24h,得到发酵液;将发酵液用无菌水稀
释100倍,然后采用紫外分光光度法测定OD
275nm值。结果表明,与优化前的培养基相比,在相
同的发酵时间采用本发明提供的培养基培养获得的发酵液的稀释液的OD
275nm值增加
185.2%,即本发明提供的培养基可使蜡样芽孢杆菌生物量显著增加。由此可见,本发明提
供的培养基更加适合蜡样芽孢杆菌的生长,可明?#36816;?#30701;发酵时间,大大?#26723;?#20102;生产成本。本
发明具有重要的应用价值。


具体实施方式


以下的实施例便于更好地理解本发明,但并不限定本发明。


下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。


下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂商店购买得
到的。


以下实施例中的定量试验,均设置三次重复实验,结果取平均值。


下述实施例中,三角瓶的规格均为250mL。


蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)G2已于2018年10月31日保藏于中国微生物菌种
保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号),
保藏编号为CGMCC No.16671。蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)G2的全称为蜡样芽孢杆菌
(Bacillus cereus)G2 CGMCC No.16671。在下文中,蜡样芽孢杆菌 (Bacillus cereus)G2
CGMCC No.16671简称为蜡样芽孢杆菌。


下述实施例中的种子液为将蜡样芽孢杆菌接种于250mL牛肉膏蛋白胨培养基
(pH7.0),30℃、170rpm振荡培养24h,得到的培养菌液。


实施例1、用于培养蜡样芽孢杆菌的培养基的制备


现有的用于培养蜡样芽孢杆菌的培养基(即优化前的培养基)由1.5重量份葡萄
糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份NaCl和96重量份水组成。本发明的发
明人为了制备发酵效果更好的培养基,进行了如下实验。


一、碳源的优化


待测培养基由1.5重量份碳源(葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、山梨醇、D-聚糖、 D-木
糖或可溶性淀粉)、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份NaCl和 96重量份水
组成。


1、将3.061mL种子液接种至装有150mL待测培养基的三角瓶中(接种量为2%(v/
v)),然后置于恒?#20081;?#24202;,30℃、170rpm振荡培养24h,得到发酵液。


2、完成?#34903;?后,用无菌水稀释发酵液100倍,得到发酵?#21512;?#37322;液。


3、完成?#34903;?后,采用紫外分光光度法对发酵?#21512;?#37322;液进行全波长扫描。


结果表明,发酵?#21512;?#37322;液在OD
275nm处有最大吸收峰。因此,后续均测定发酵?#21512;?#37322;
液的OD
275nm值。


4、完成?#34903;?后,采用紫外分光光度法测定发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值。


检测结果见表1。结果表明,当待测培养基中的碳源为葡萄糖?#20445;?#21457;酵?#21512;?#37322;液的
OD
275nm值最高。由此可见,与其它碳源(如麦芽糖、乳糖、蔗糖、山梨醇、D-聚糖、 D-木糖、可溶
性淀粉)相比,蜡样芽孢杆菌对葡萄糖的利用率更高。


表1










碳源


发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值




葡萄糖


0.144




麦芽糖


0.084




乳糖


0.101




蔗糖


0.100




山梨醇


0.117




D-聚糖


0.141




D-木糖


0.100




可溶性淀粉


0.063






二、氮源的优化


待测培养基由1.5重量份氮源(酵母浸粉、大豆蛋白胨、牛肉膏、胰蛋白胨、花生饼
粉、玉米浆干粉或棉籽粉)、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和96.5重量份水组成。


1、将3.061mL种子液接种至装有150mL待测培养基的三角瓶中(接种量为2%(v/
v)),然后置于恒?#20081;?#24202;,30℃、170rpm振荡培养24h,得到发酵液。


2、完成?#34903;?后,用无菌水稀释发酵液100倍,得到发酵?#21512;?#37322;液。


3、完成?#34903;?后,采用紫外分光光度法测定发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值。


检测结果见表2。结果表明,当待测培养基中的氮源为胰蛋白胨?#20445;?#21457;酵?#21512;?#37322;液
的OD
275nm值最高。由此可见,与其它氮源(如酵母浸粉、大豆蛋白胨、牛肉膏、花生饼粉、玉米
浆干粉、棉籽粉)相比,蜡样芽孢杆菌对胰蛋白胨的利用率更高。


表2










氮源


发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值




酵母浸粉


0.101




大豆蛋白胨


0.147




牛肉膏


0.102




胰蛋白胨


0.169




花生饼粉


0.104




玉米浆干粉


0.086




棉籽粉


0.120






三、无机盐的优化


待测培养基由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5 重
量份无机盐(Na
2HPO
4·12H
20、KCl、K
2HPO
4·3H
20、MgSO
4·7H
20、KH
2PO
4、NaCl、NaH
2PO
4·2H
20
或CaCO
3)和96重量份水组成。


1、将3.061mL种子液接种至装有150mL待测培养基的三角瓶中(接种量为2%(v/
v)),然后置于恒?#20081;?#24202;,30℃、170rpm振荡培养24h,得到发酵液。


2、完成?#34903;?后,用无菌水稀释发酵液100倍,得到发酵?#21512;?#37322;液。


3、完成?#34903;?后,采用紫外分光光度法测定发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值。


检测结果见表3。结果表明,当待测培养基中的无机盐为KH
2PO
4?#20445;?#21457;酵?#21512;?#37322;液的
OD
275nm值最高。由此可见,与其它无机盐(如Na
2HPO
4·12H
20、KCl、K
2HPO
4·3H
20、 MgSO

7H
20、NaCl、NaH
2PO
4·2H
20、CaCO
3)相比,蜡样芽孢杆菌对KH
2PO
4的利用率更高。


表3










无机盐


发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值




Na
2HPO
4·12H
20


0.050




KCl


0.112




K
2HPO
4·3H
20


0.114




MgSO
4·7H
20


0.095




KH
2PO
4


0.127




NaCl


0.125




NaH
2PO
4·2H
20


0.101




CaCO
3


0.105






四、培养基中葡萄糖含量的优化


培养基1由0.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份
NaCl和97.0重量份水组成。


培养基2由1.0重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份
NaCl和96.5重量份水组成。


培养基3由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份
NaCl和96.0重量份水组成。


培养基4由2.0重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份
NaCl和95.5重量份水组成。


培养基5由2.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份
NaCl和95.0重量份水组成。


培养基6由3.0重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份
NaCl和94.5重量份水组成。


培养基7由3.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份
NaCl和94.0重量份水组成。


培养基8由4.0重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份
NaCl和93.5重量份水组成。


培养基9由4.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份
NaCl和93.0重量份水组成。


培养基10由5.0重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.5重量份
NaCl和92.5重量份水组成。


1、将3.061mL种子液接种至装有150mL待测培养基(培养基1、培养基2、培养基3、培
养基4、培养基5、培养基6、培养基7、培养基8、培养基9或培养基10)的三角瓶中 (接种量为
2%(v/v)),然后置于恒?#20081;?#24202;,30℃、170rpm振荡培养24h,得到发酵液。


2、完成?#34903;?后,用无菌水稀释发酵液100倍,得到发酵?#21512;?#37322;液。


3、完成?#34903;?后,采用紫外分光光度法测定发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值。


检测结果见表4。结果表明,当待测培养基中葡萄糖的重量份为1.5?#20445;?#21457;酵?#21512;?#37322;
液的OD
275nm值最高。说明采用含1.5重量份葡萄糖的培养基培养蜡样芽孢杆菌的效果最好。


表4










培养基中葡萄糖的重量份


发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值




0.5重量份


0.054




1.0重量份


0.098




1.5重量份


0.174




2.0重量份


0.128




2.5重量份


0.108




3.0重量份


0.154




3.5重量份


0.072




4.0重量份


0.133




4.5重量份


0.099




5.0重量份


0.105






五、培养基中胰蛋白胨含量的优化


培养基1由0.5重量份胰蛋白胨、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和97.5重量份
水组成。


培养基2由1.0重量份胰蛋白胨、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和97.0重量份
水组成。


培养基3由1.5重量份胰蛋白胨、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和96.5重量份
水组成。


培养基4由2.0重量份胰蛋白胨、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和96.0重量份
水组成。


培养基5由2.5重量份胰蛋白胨、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和95.5重量份
水组成。


培养基6由3.0重量份胰蛋白胨、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和95.0重量份
水组成。


培养基7由3.5重量份胰蛋白胨、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和94.5重量份
水组成。


培养基8由4.0重量份胰蛋白胨、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和94.0重量份
水组成。


培养基9由4.5重量份胰蛋白胨、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和93.5重量份
水组成。


培养基10由5.0重量份胰蛋白胨、1.5重量份葡萄糖、0.5重量份NaCl和93.0重量份
水组成。


1、将3.061mL种子液接种至装有150mL待测培养基(培养基1、培养基2、培养基3、培
养基4、培养基5、培养基6、培养基7、培养基8、培养基9或培养基10)的三角瓶中 (接种量为
2%(v/v)),然后置于恒?#20081;?#24202;,30℃、170rpm振荡培养24h,得到发酵液。


2、完成?#34903;?后,用无菌水稀释发酵液100倍,得到发酵?#21512;?#37322;液。


3、完成?#34903;?后,采用紫外分光光度法测定发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值。


检测结果见表5。结果表明,当待测培养基中胰蛋白胨的重量份为5.0?#20445;?#21457;酵?#21512;?br>释液的OD
275nm值最高。说明采用含5.0重量份胰蛋白胨的培养基培养蜡样芽孢杆菌的效果最
好。


表5










培养基中胰蛋白胨的重量份


发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值




0.5重量份


0.117




1.0重量份


0.113




1.5重量份


0.128




2.0重量份


0.150




2.5重量份


0.120




3.0重量份


0.098




3.5重量份


0.160




4.0重量份


0.139




4.5重量份


0.156




5.0重量份


0.194






六、培养基中KH
2PO
4含量的优化


培养基1由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.05重量份
KH
2PO
4和96.45重量份水组成。


培养基2由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.10重量份
KH
2PO
4和96.40重量份水组成。


培养基3由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.15重量份
KH
2PO
4和96.35重量份水组成。


培养基4由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.20重量份
KH
2PO
4和96.30重量份水组成。


培养基5由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.25重量份
KH
2PO
4和96.25重量份水组成。


培养基6由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.30重量份
KH
2PO
4和96.20重量份水组成。


培养基7由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.35重量份
KH
2PO
4和96.15重量份水组成。


培养基8由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.40重量份
KH
2PO
4和96.10重量份水组成。


培养基9由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.45重量份
KH
2PO
4和96.05重量份水组成。


培养基10由1.5重量份葡萄糖、1.5重量份胰蛋白胨、0.5重量份牛肉膏、0.50重量
份KH
2PO
4和96.00重量份水组成。


1、将3.061mL种子液接种至装有150mL待测培养基(培养基1、培养基2、培养基3、培
养基4、培养基5、培养基6、培养基7、培养基8、培养基9或培养基10)的三角瓶中 (接种量为
2%(v/v)),然后置于恒?#20081;?#24202;,30℃、170rpm振荡培养24h,得到发酵液。


2、完成?#34903;?后,用无菌水稀释发酵液100倍,得到发酵?#21512;?#37322;液。


3、完成?#34903;?后,采用紫外分光光度法测定发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值。


检测结果见表6。结果表明,当待测培养基中KH
2PO
4的重量份为0.05?#20445;?#21457;酵?#21512;?#37322;
液的OD
275nm值最高。说明采用含0.05重量份KH
2PO
4的培养基培养蜡样芽孢杆菌的效果最好。


表6










七、用于培养蜡样芽孢杆菌的培养基的获得


在上述?#34903;?#19968;至六的单因素试验的基础上,以葡萄糖用量(A)、胰蛋白胨用量 (B)
和KH
2PO
4用量(C)为考察因素,以蜡样芽孢杆菌生物量(即发酵液的OD
275nm值) 为评价指标,
通过L
9(3
3)正交试验设计优化培养基的组分和含量。


结果表明,胰蛋白胨用量对蜡样芽孢杆菌生物量具有显著影响,葡萄糖用量和对
蜡样芽孢杆菌生物量的影响不显著;A、B和C对蜡样芽孢杆菌生物量的影响的程度有较大差
异,具体为B\u0026gt;C\u0026gt;A。


对各因素水平间进行?#25605;?#27604;?#31232;?#32467;果表明,A1、A2、A3之间均没有显著性差异; B1
与B3之间存在显著性差异,B2与B3之间存在显著性差异,B1与B2无显著性差异; C1、C2、C3
之间均没有显著性差异。取各因素较高水平的组合,得到用于培养蜡样芽孢杆菌的培养基
的组?#27835;狝
1B
3C
2,即用于培养蜡样芽孢杆菌的培养基(即优化后的培养基)由1.0重量份葡萄
糖、5.5重量份胰蛋白胨、0.05重量份KH
2PO
4和93.45重量份水组成。优化后的培养基中,葡萄
糖的浓度为10g/L,胰蛋白胨的浓度为55g/L,KH
2PO
4的浓度为0.5g/L。


八、发酵效果比较


1、将3.061mL种子液接种至装有150mL待测培养基(优化前的培养基或优化后的培
养基)的三角瓶中(接种量为2%(v/v)),然后置于恒?#20081;?#24202;,30℃、170rpm 振荡培养24h,得
到发酵液。


2、完成?#34903;?后,用无菌水稀释发酵液100倍,得到发酵?#21512;?#37322;液。


3、完成?#34903;?后,采用紫外分光光度法测定发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值。


检测结果见表7。结果表明,与优化前的培养基相比,采用优化后的培养基发酵培
养获得的发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值增加185.2%,即优化后的培养基可使蜡样芽孢杆菌生物
量显著增加。


表7










待测培养基


发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值




优化前的培养基


0.081




优化后的培养基


0.231






按照上述方法,将优化后的培养基替换为优化后的培养基甲或优化后的培养基
乙,其它?#34903;?#22343;不变。结果表明,与优化前的培养基相比,采用优化后的培养基甲或优化后
的培养基乙发酵培养获得的发酵?#21512;?#37322;液的OD
275nm值也显著增加,即优化后的培养基甲或
优化后的培养基乙也可使蜡样芽孢杆菌生物量显著增加。


优化后的培养基甲由0.8重量份葡萄糖、4.5重量份胰蛋白胨、0.03重量份KH
2PO
4和
94.67重量份水组成。优化后的培养基甲中,葡萄糖的浓度为8.0g/L,胰蛋白胨的浓度为
45.0g/L,KH
2PO
4的浓度为0.3g/L。


优化后的培养基乙由1.2重量份葡萄糖、6.5重量份胰蛋白胨、0.07重量份KH
2PO
4和
92.23重量份水组成。优化后的培养基乙中,葡萄糖的浓度为12.0g/L,胰蛋白胨的浓度为
65.0g/L,KH
2PO
4的浓度为0.7g/L。


关于本文
本文标题:一种蜡样芽孢杆菌的培养方法及其专用培养基.pdf
链接地址:http://www.pqiex.tw/p-6153542.html
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